SNAREs对动脉内皮细胞凋亡增殖的影响及其在动脉粥样硬化发病机制中的作用研究

内皮细胞的膜运输系统对动脉粥样硬化发生中有重要作用，SNAREs (可溶性N－乙基马来酰胺敏感因子（NSF）附着蛋白膜受体）是该系统的关键蛋白家族，并且它们对动脉粥样硬化的经典致病因素有直接作用，如调节胆固醇的胞内运输代谢和胰岛素敏感性，使重要蛋白caveolin-1、eNOS转运受阻等。故我们认为SNAREs功能异常可能影响内皮细胞增殖凋亡导致动脉粥样硬化。鉴于SNAREs中SNAP-23、 syntaxin-4调节胞吐和介导caveoloe运输，故观察它们在高脂饮食动脉粥样硬化兔模型内皮细胞中的表达和定位；培养人动脉内皮细胞，通过siRNA技术或转染改变其基因表达量，或用NO供体使SNAREs复合体不能解离，观察不同处理后的细胞凋亡和增生改变，以及caveolin-1、eNOS的2表达和胞内转运定位改变。

细胞内的膜运输系统对内皮细胞的功能有重要作用，SNAREs (可溶性N－乙基马来酰胺敏感因子（NSF）附着蛋白膜受体）是该系统的关键蛋白家族，而SNAP-23、 syntaxin-4是其中的关键蛋白之一。我们在高脂饮食所致兔动脉粥样硬化模型中，采用Western blot法发现它们的表达是降低的，提示它们可能参与了动脉粥样硬化的过程。动脉粥样硬化的重要发病机制是是内皮功能障碍，因此我们进一步探讨它们对内皮功能的影响。在培养的人动脉内皮细胞中，我们采用siRNA转染细胞，使得SNAP-23、 syntaxin-4的表达均减少，此后观察内皮细胞生长情况所受的影响。使用流式细胞技术了解细胞的凋亡情况，发现在干扰后细胞的凋亡均较对照组显著增加，采用MTT法监测细胞的增殖情况，发现细胞的增殖速度较阴性对照组显著下降。这些改变与动脉粥样硬化时内皮细胞的生长情况相类似。内皮细胞所产生的NO是维持内皮细胞功能重要因子，我们采用Griess Agent法测量来间接反映NO产量，发现干扰后NO的产量下降。NO主要来源于eNOS，并受到Caveolin-1的影响，接下来我们Western blot法发现caveolin-1在干扰后表达减少，而eNOS的表达无显著改变。鉴于eNOS的在细胞内的分布与其功能相关，故我们在采用荧光免疫法在共聚焦显微镜下观察到，经过干扰后eNOS的分布在细胞核周围分布较多，而对照组的分布在外周部分更浓，提示siRNA干扰膜转运蛋白后可能影响eNOS的转运至细胞膜，从而减少NO的生成，最终影响内皮细胞的功能，导致增殖异常促进动脉硬化的发生。因此SNAP-23、 syntaxin-4可能通过影响内皮细胞中eNOS分布而参与动脉粥样硬化。