FFA-FABP1-PPARα轴在高脂血症性胰腺炎动物模型中促进炎症重症化演变及调控的分子机制研究

Hyperlipidemic pancreatitis with severe and recurrent trends, free fatty acids increased start-up factors of the disease, its pathogenesis is unknown. Recent studies indicated that liver-type fatty acid binding protein(L-FABP) or Peroxisome proliferator activated receptor(PPAR) is involved in Free fat acid ( FFA ) related to metabolic disease damage. Previous studies have chosen PT-PCR for indicate that the expression of FABP1 were detected in both the group of hyperlipidemic pancreatitis model and normal pancreatic tissues; however FABP1 is over-expression in hyperlipidemic pancreatic tissue by qRT-pcr, PPAR Alpha is weakened and pancreatic acinar is damaged more seriously. It is speculated that the FFA/FABP1/PPARα may be involved in the progress of hyperlipidemic pancreatitis. But, how the FFA/PPARs/FABPs resulted in development of hyperlipidemic pancreatitis is an unsolved problem. In this study, in vitro and in vivo hyperlipidemic pancreatitis model, to detect the regulatory mechanism about FFA/ FABP1 /PPARα axis promoting pancreatic acini necrosis in hyperlipidemic severe acute pancreatitis， and co-immunoprecipitationmethod PPARα interacting proteins or downstream target proteins in order to expand the pathogenesis of hyperlipidemic pancreatitis.

高脂血症性胰腺炎具有显著的重症和复发趋势，游离脂肪酸升高是该病的启动因素，其发病机制不详。新近研究表明，FABP1/PPARα参与了游离脂肪酸相关的代谢性疾病损伤。课题组前期采用RT-PCR显示，动物模型中高脂血症性胰腺炎及正常胰腺组织中均有FABP1表达，qRT-PCR提示在高脂血症性胰腺炎组FABP1明显高表达，而PPARα表达减弱，且胰腺腺泡损伤更严重，故推测FFA/FABP1/PPARα可能参与了高脂血症性胰腺炎的进展。目前需要解决的难题是FFA/FABPs/PPARs如何导致高脂血症性胰腺炎重症化。本研究采用体内外高脂血症性胰腺炎模型，探讨FFA/FABP1/PPARα轴促进高脂血症性胰腺炎腺泡细胞坏死与严重重症化演变的作用及其调控机制，并以免疫共沉淀法研究PPARα相互作用的蛋白或下游靶蛋白，以期拓展高脂血症性胰腺炎发病机制。

项目背景急性胰腺炎（AP）是由多种病因引起胰酶激活，以胰腺局部炎症反应为主要特征，是临床上常见的急腹症。高脂血症性胰腺炎（HLAP)发病率升高、发病机制复杂，有临床研究和基础研究认为高血脂可以加重AP的进程。本研究的总目标是研究肝脏脂肪酸结合蛋白（L-FABP）/过氧化物酶体增殖物激活受体（PPARα）在大鼠高脂血症性胰腺炎中的抑制炎症作用。84只雄性SD大鼠禁食过夜，将大鼠随机分配五组，分别为正常对照组（生理盐水注射组）、高脂对照组（单纯高脂饲养组）、AP组、高脂大鼠急性胰腺炎、非诺贝特干预的高脂大鼠胰腺炎组，后三组经精氨酸腹腔注射后再随机分成6h、12h、24h、48h四个亚组，进行血清脂肪酶、淀粉酶水平检测，胰腺组织作切片后进行HE染色和免疫荧光染色在光镜下观察胰腺组织的病理变化。体外提取大鼠胰腺原代腺泡细胞，棕榈酸制造体外高脂模型，雨蛙肽刺激制作胰腺腺泡细胞损伤模型，分为正常对照组、高脂组、非诺贝特干预的高脂组、AP组、HLAP组、非诺贝特干预的高脂血症性胰腺炎组。采用qRT-PCR技术，分别对各组大鼠胰腺组织和体外腺泡细胞的L-FABP及PPARα的mRNA水平进行检测。采用western blot方法对大鼠胰腺组织和胰腺原代腺泡细胞的L-FABP和PPARα的水平进行评估。而后，将胰腺组织切片进行免疫组化染色处理，在光镜下观察胰腺细胞中L-FABP和PPARα的表达。胰腺炎造模后24小时炎症最重，HE染色镜下观察到胰腺坏死出血，HLAP组病理评分高于AP组（P<0.05），非诺贝特干预的HLAP组病理评分低于HLAP组（P<0.05）。体内体外模型中，HLAP组L-FABP和PPARα的mRNA表达水平、蛋白表达水平均低于同时间点AP组L-FABP和PPARα的mRNA表达水平（P<0.05），非诺贝特干预组L-FABP和PPARα的mRNA表达水平、蛋白表达水平较HLAP组升高（P<0.05）。 大鼠模型中高甘油三酯血症加重急性胰腺炎，与AP组相比，HLAP胰腺组织中L-FABP和PPARα的表达水平下调、抗炎作用减弱。PPARα激动剂非诺贝特上调PPARα，因而对HLAP炎症的发展具有显著的保护作用。