脑心肌炎病毒流行病学调查及人畜传播机制的研究

脑心肌炎病毒是一种重要的人畜共患病病原体，严重危害人民群众及家畜的健康。近年来，在我国部分地区已发现人畜共患脑心肌炎病毒的存在，但关于我国脑心肌炎病毒流行范围、流行特征以及人畜间传播机制尚无详细完整的报道，且尚无较好的检测技术和预防手段。因此，本项目拟通过建立双抗体夹心检测抗原、捕获法检测IgM、双抗原夹心或竞争法检测IgG等 ELSIA检测技术以及快速检测EMCV核酸的实时荧光PCR方法；并应用这些技术和方法对我国具代表性区域的各种动物和人群进行抗体、抗原和核酸的检测，系统分析其流行情况、易感性、基因型，探讨人畜之间传播的途径和影响因素和各标志物的关系以及动态变化，为预防脑心肌炎人畜之间的传播以及爆发流行提供相应的技术储备。

脑心肌炎病毒是一种重要的人畜共患病病原体，严重危害人民群众及家畜健康。近年来，我国部分地区已发现人畜共患脑心肌炎病毒的存在，但关于我国脑心肌炎病毒流行范围、流行特征以及人畜间传播机制尚无详细完整的报道，尚无较好的检测技术和预防手段。通过本项目的研究，建立了RT-PCR、TaqMan Real-time PCR和RT-LAMP等病毒核酸检测方法；建立了双抗原夹心检测抗体ELISA法、捕获法检测IgM ELISA 方法，并制备了对应检测方法的阴、阳性对照品；建立的方法均具备灵敏性好、特异性高的特点，为进一步开展流行病学调查以及临床检测提供了有效手段和技术保障，其中双抗原夹心检测EMCV抗体ELISA试剂盒获得了国家发明专利，具有较好的应用和推广价值。在全国范围进行了血清病学调查：⑴东北、华北、西北等7个地区健康人群平均抗体阳性率为30.56%，东北地区最高，阳性率为43.23%，华中地区最低，阳性率为11.26%，各区域之间差异显著；通过分析，抗体阳性率与性别之间不存在关联，与年龄存在显著的正相关。0-20岁人群抗体阳性率最低（13.50%）；>60 岁人群抗体阳性率最高（38.71%）。⑵这7个地区猪群平均抗体阳性率为77.00%，明显高于人源EMCV抗体，各区域之间差异显著。⑶从固定猪群仔猪出生开始，之后15d、30d、60d、75d、90d、120d、150d分别采血进行动态检测。结果表明存在两个EMCV抗体峰。第一个出现在30d,随后抗体阳性率降低，60d达到最低谷；第二个出现在75d之后。因此，仔猪对EMCV最敏感的时期是30d-75d，这也是猪场重点预防EMCV感染的时期。 流行病学调查中首次分离到EMCV甘肃毒株，命名为GS01，对其全基因组进行测序，基因全长为7717bp，CDS区6879bp， Genbank登记号为：KJ524642，该毒株对小鼠具有极高致死性。同时，试制了以EMCV结构蛋白VP1为基础的腺病毒疫苗和针对VP1靶点的shRNA载体，具有较好的保护性和干扰效果，为该病毒的预防和治疗奠定了基础。本项目完成了计划的全部任务，取得了一定的进展，通过本项目的研究，可为进一步深入开展EMCV 相关研究提供数据参考和依据，为检测、预防和治疗人畜共患脑心肌炎提供相应的技术储备。