小肠结肠炎耶尔森菌分型方法研究

细菌分子分型技术是细菌分子流行病学研究的重要手段，稳定性与可重复性强，可应用于暴发溯源、病原特征分布、进化分析等。小肠结肠炎耶尔森菌感染不但可造成人类腹泻，更可导致一系列慢性自身免疫性肠外并发症，是各国进出口检验检疫的必需项目。为对多种来源菌株的进行有效的分子流行病学分析，追踪菌株传播路径，本研究拟在以往的研究基础上，建立一套小肠结肠炎耶尔森菌分子分型体系。本研究拟挑选30年来在我国各地分离到的，在流行病学与病原学特征上具有代表性的小肠结肠炎耶尔森菌，进行脉冲场凝胶电泳（选用另一种限制性内切酶）、多位点序列分析、多位点串联重复序列分析三种方法的分子分型，分析评价三种分型方法对于小肠结肠炎耶尔森菌分型的分辨力与适用的分子流行病学研究方向，建立一套小肠结肠炎耶尔森菌分子分型选择标准与分型体系，应用于暴发溯源、短期与长期流行病学调查、进化分析等不同目的的小肠结肠炎耶尔森菌分子流行病学研究。

我们已经初步评价和考核了PFGE、MLST、MLVA三种分型方法对于小肠结肠炎耶尔森菌的分辨力与适用性以及他们之间的互补性。 逐步完善小肠结肠炎耶尔森菌分子分型体系，探讨确定根据不同研究目的，如何进行分子分型方法选择的理论依据。通过我们的研究证实猪咽部小肠结肠炎耶尔森菌的携带率高达19.93%。我们认为猪不仅是小肠结肠炎耶尔森菌的主要宿主,还是人类感染小肠结肠炎耶尔森病的潜在重要传染源。另外犬中小肠结肠炎耶尔森菌的带菌率也较高，更加奇怪的是猪、犬、腹泻病人中PFGE的主要带型均为K6GN11C30021；病人分离株和猪犬中分离的致病性小肠结肠炎耶尔森菌PFGE带型具有高度相似性，说明猪犬等是造成人类感染小肠结肠炎耶尔森菌的重要因素。中国小肠结肠炎耶尔森菌只有O:3和O:9血清型致病，值得关注的是，八九十年代期间分布仅次于3/O:3的2/O:9生物血清型现已几乎消失，优势菌株血清型发生了明显改变。生物血清型1B /O: 8与2/O: 9免疫组学和蛋白质组学特征研究表明这两个不同生物血清型菌株的LPS、Yops、膜蛋白以及全菌蛋白无论是PAGE图谱，还是免疫学特征方面均存在差异。全基因组测序和比较基因组分析显示，高致病性enterocolitica亚种的1B/O:8型菌株与低致病性的palearctica亚种菌株在基因组同源性约为95%，二者具有各不相同的与各自致病性相关的位点，推测两类菌株是从小肠结肠炎耶尔森菌远祖分别按照不同的途径进化而来并获得了各自不同的致病性。对中国的致病性小肠结肠炎耶尔森菌株进行了MLVA的分型研究，结果表明218株致病性菌株被分成了104个MLVA型别，具有较高的分型能力。通过MLVA方法，将中国主要的致病性小肠结肠炎耶尔森菌血清型O:3和O:9分成了两个大类；并且该分型技术对背景情况相似的菌株的分辨力更高，是一种适合于病原菌监测和暴发调查溯源的分型方法。同时，我们的研究结果还表明，对于高致病性、低致病性和非致病菌株的小肠结肠炎耶尔森菌应采用不同的VNTR位点组合进行MLVA分型研究。