淫羊藿苷对激素抵抗型肾病综合征大鼠GR/SD2AP及足细胞自噬的调节作用研究

There is no effective treatment for Nephrotic syndrome (NS), GCs are the mainstay of NS therapy,but even GC in combination with new immunosuppressants there are still some patients can not obtain clinical remission. The main mechanism of SRNS is considered about the damage to the GCs functional. However, the Chinese medicine considers that the GCs can cause the kidney-yang deficiency . In the research project, the rats of SRNS model were duplicated by Doxorubicin, and treated with GCs. At the different stages of GCs treatment, the compatibility of icariin (ICA) was used to supplement the kidney yang. The project aims to study the effects and mechanisms of the compatibility use of ICA and GCs, by observe the podocyte autophagy and expression of GR.Through HPA axis of SRNS model, to verify the source of "friendly fire to blow falls" theorys of Chinese medicine. Lay a theoretical support for clinical practice and develop a better Traditional Chinese Medicine for prevention and treatment of SRNS.

目前激素抵抗型肾病综合征（SRNS）无特效疗法，现代治疗仅可使部分缓解，易进展为终末期肾病。课题组采用右归丸配合糖皮质激素治疗，疗效优于单纯使用激素治疗。认为SRNS激素耐药主要与肾阳虚有关，符合中医“益火之源，以消阴翳”的理论，中西医结合有治疗优势，但因部分中草药的肾毒性及复方制剂的复杂性，限制了补阳药在肾病中的应用。我们提出“淫羊藿苷联合激素干预SRNS提高疗效的机制与温阳药调节GR数量和GR亚型比例，调节足细胞SD2AP相关蛋白及自噬有关”的假说，病证结合，以下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴功能为阳虚证指标，进行GC耐药与肾阳虚证相关性研究，采用QRT-PCR、WB、细胞免疫荧光、激光共聚焦、透射电镜等技术，在免疫方面检测GC-GR作用环节；在肾小球检测足细胞裂孔膜及相关蛋白表达、足细胞自噬体，阐明淫羊藿苷联合GC对SRNS的协同作用及分子机制，为中西医结合治疗SRNS寻找新途径。

目前激素抵抗型肾病综合征（SRNS）无特效疗法，现代治疗仅可使部分缓解，易进展为终末期肾病。课题组前期研究表明SRNS患者多属肾阳虚证，应用补阳健肾方联合GC治疗SRNS疗效优于单纯GC治疗，符合中医“益火之源，以消阴翳”的理论。课题组对该方中君药淫羊藿的主要单体成分淫羊藿苷及复方右归丸干预SRNS，提出“淫羊藿苷联合激素干预SRNS提高疗效的机制与温阳药调节GR数量和GR亚型比例，调节足细胞SD2AP相关蛋白及自噬有关”的假说，以下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴功能为阳虚证指标，进行GC耐药与肾阳虚证相关性研究，采用QRT-PCR、WB、细胞免疫荧光、激光共聚焦、透射电镜等技术检测足细胞裂孔膜mRNA及相关蛋白表达、GC-GR作用环节及足细胞自噬体。结果表明：淫羊藿苷联合GC组肾组织中Nephrin、Podocin蛋白的相对表达量较模型组上调（P<0.05），联合组足细胞自噬信号通路相关蛋白PI3K、pAkt、mTOR较模型组表达降低，而PTEN表达升高。结论：1淫羊藿苷联合GC干预SRNS提高疗效的机制与温阳药调节GR数量和GR亚型比例，调节足细胞SD2AP相关蛋白及自噬有关。2阿霉素可成功建立FSGS病理模型，出现足细胞损伤，肾组织超微结构改变，加速肾小球硬化发生发展的进程，该模型大鼠对激素治疗不敏感，且符合肾阳虚证，故可作为SRNS肾阳虚证模型加以研究应用；3右归丸通过Dicer-mi RNA途径调控足细胞裂孔隔膜分子Nephrin、CD2AP、Podocin及骨架蛋白synaptopodin表达，减少凋亡，改善足突融合，发挥减毒增敏作用；4.淫羊藿苷、右归丸等温阳药可以改善大鼠肾功能，减少肾小球硬化程度，从中药复方及单体进一步证实温阳法对激素具有增敏作用。本课题阐明淫羊藿苷联合GC对SRNS的协同作用及分子机制，为中西医结合治疗SRNS寻找新途径。