基于原代人脂肪基质细胞构建即刻应用型生物骨

为提升组织工程化骨的时效性和安全性，本项目拟直接应用原代人脂肪基质细胞（hADSC）结合同一患者的富血小板血浆构建一种纯生物的新型组织工程化骨。该新型生物骨充分利用hADSC来源丰富的特点，在分离原代细胞的即刻就可构建完成，避免了体外传代、扩增对细胞的不良影响和时间消耗，其安全、快捷的特点可以显著提高患者的接受程度和临床的可操作性。内容包括：①通过体外实验筛选分离、纯化原代hADSC的方案；②通过裸鼠体内实验验证即刻应用型生物骨的体内成骨效果，并进一步确定分离、纯化细胞的最佳方案；③通过研究新型生物骨中原代hADSC在体内的转归和诱导干细胞归巢的作用揭示其促进骨缺损修复的机理。成功构建此即刻应用型生物骨将为临床治疗提供一种新选择，尤其在口腔、颌面部一些小型、不规则骨缺损的修复方面，其有着广阔的应用前景，而且直接使用原代hADSC构建组织工程复合物这一创新思路也将促进骨组织工程技术的发展。

本项目进展顺利，已经基本完成课题内容，总结如下：. 1.成功应用改良酶消化法快速获取原代人脂肪基质细胞（human adipose derived stromal cell, hADSC），并且获得较为理想的体外、体内成骨效果。.通过密度梯度离心联合差速贴壁法，本研究小组成功分离出大量原代hADSC，并通过体外实验证实了其成骨向分化能力。我们还成功构建了基于原代hADSC的即刻应用型生物骨，并通过修复裸鼠临界骨缺损，验证了其体内的成骨能力。. 2. 促成骨因子进一步提升原代hADSC的体内成骨效果。.通过实验探索，本研究小组发现辛伐他汀（simvastatin，SIM）可以显著提高原代hADSC的体外和体内的成骨效果。而且，辛伐他汀使用安全可靠，以往主要用于降低血清胆固醇，预防心血管疾病，临床已经应用了多年。我们针对辛伐他汀促进成骨的作用设计了系统的体外和体内实验，检测了不同浓度辛伐他汀对原代及传代培养的hADSC成骨向分化的促进作用。研究发现，辛伐他汀可以显著激发hADSC的成骨向分化潜能，促进其体内成骨。. 3. hADSC促进骨缺损修复机制的探索。.为了探索以人hASCs在体内的转归及促进骨缺损修复的机制，本研究小组设计多时间点连续取材的体内实验。通过实验我们得出结论：人脂肪基质细胞在体内成骨过程中发挥了关键的作用，包括：分泌大量细胞外基质，促进细胞外基质矿化和引导新生类骨组织形成等。. 本研究的相关成果已经发表了一篇SCI文章和三篇中文核心期刊文章，并且申请了国家实用新型专利一项，有一项国家发明专利经初审合格后已进入实质审查阶段。