人miRNA-181a 靶向抑制癌基因RalA及在慢性粒细胞白血病（CML)中的功能研究

本课题前期研究表明，miR-181a在K562细胞中极低水平表达，转染miR-181a前体进入K562细胞可显著抑制细胞增殖.利用Target Scan软件预测和全基因组表达谱芯片相结合的方法筛选出miR-181a的四个候选靶基因，其中 RalA是Ras家族成员，是bcr-abl下游分子，可能与CML发病有关..本研究将鉴定miR-181a靶基因RalA,并分析它在K562、kcl-22细胞中的功能。Western blot检测转染miR-181a之后RalA蛋白质表达水平；构建包含RalA基因3'非编码区 (UTR)的荧光素报告载体以证实RalA为miR-181a直接的靶基因。随后将miR-181a前体和siRNA-RalA转染K562细胞，平行观察它们对细胞生物学活性（细胞增殖、凋亡、细胞周期、迁移等）的改变，并分析miR-181a对白血病的抑制效应和RalA的贡献。

本课题前期研究表明，miR-181a在K562细胞中极低水平表达，转染miR-181a前体进入K562细胞可显著抑制细胞增殖.利用Target Scan软件预测和全基因组表达谱芯片相结合的方法筛选出miR-181a的四个候选靶基因，其中 RalA是Ras家族成员，是bcr-abl下游分子，可能与CML发病有关..本研究将鉴定miR-181a靶基因RalA,并分析它在K562、kcl-22细胞中的功能。Western blot检测转染miR-181a之后RalA蛋白质表达水平；构建包含RalA基因3'非编码区 (UTR)的荧光素报告载体，证实RalA为miR-181a直接的靶基因。随后将miR-181a前体和siRNA-RalA转染K562和KCL-22细胞，平行观察它们对细胞生物学活性（细胞增殖、凋亡、细胞周期、迁移等）的改变，结果发现miR-181a 和RalA siRNA有相似的功能，显著抑制K562和KCL-22细胞生长、促进凋亡并抑制细胞周期G2,同时证实miR-181a and RalA siRNA可以提高以马替尼（imatinib）和(Arsenic trioxide)的敏感性。最后 ，我们采用KEGG方法对RalA的信号通路进行的分析。.总之，RalA在CML中是一个重要的癌基因，miR-181a通过靶向抑制RalA水平发挥多种抗白血病作用。生物信息学预测与基因表达谱芯片相结合是鉴定miRNA靶基因的可行的方法。.