杜氏利什曼原虫比较蛋白质组学研究及种特异性抗原筛选

黑热病在我国发病率有逐渐增加的趋势，如不及时诊断和治疗，常可导致患者死亡。国内目前尚无简便实用、准确有效的实验室检测诊断技术来诊断黑热病。本研究拟采用体外将杜氏利什曼原虫前鞭毛体转化成无前鞭毛体，采用比较蛋白质组学技术比较杜氏利什曼原虫无鞭毛体与前鞭毛体在虫体总蛋白、外膜蛋白和线粒体（动基体）蛋白质表达的差异，挑选杜氏利什曼原虫无鞭毛体与前鞭毛体高表达蛋白，特别是杜氏利什曼原虫无鞭毛体高表达蛋白，结合免疫学方法进行鉴定，筛选出杜氏利什曼原虫种特异性抗原，特别是杜氏利什曼原虫无鞭毛体种特异性抗原，构建黑热病Dip－stick试剂盒。该研究为进一步从分子水平揭示我国内脏利什曼病病原体的致病机制和研制新一代黑热病诊断试剂奠定基础。

本课题首先建立了一种新的快速、稳定的体外转化培养杜氏利什曼原虫四川人株无鞭毛体的方法。将杜氏利什曼原虫前鞭毛体转化成无鞭毛体，采用比较蛋白质组学技术比较杜氏利什曼原虫无鞭毛体与前鞭毛体在虫体总蛋白和外膜蛋表达差异，挑选杜氏利什曼原虫无鞭毛体与前鞭毛体高表达蛋白，特别是杜氏利什曼原虫无鞭毛体高表达蛋白，挑选出27个杜氏利什曼原虫无鞭毛体高表达蛋白，结合免疫学方法鉴定，筛选出2个杜氏利什曼原虫无鞭毛体高表达的种特异性抗原。同时采用杜氏利什曼原虫前鞭毛体体外感染不同种属来源的巨噬细胞，结果发现杜氏利什曼原虫对不同种属细胞感染差异与杜氏利什曼原虫感染巨噬细胞是否诱导的巨噬细胞凋亡有关。开展四川省汶川县犬利什曼病流行病学调查、虫种鉴定及系统发育分析，证实汶川县犬利什曼病感染率为37.21％，犬利什曼原虫为未定种；并对四川省黑热病疫区家犬密度、犬感染率与黑热病发病关系进行分析，发现在犬源性黑热病疫区，犬感染率与人群黑热病感染率高度相关，犬密度与黑热病发病率无相关关系。本课题研究为进一步从分子水平揭示我国内脏利什曼病病原体的致病机制、黑热病防治策略的制定和研制新一代黑热病诊断试剂奠定基础。