止颤汤对帕金森病大鼠P62-LC3信号通路调节 促进α-syn代谢的研究

PD is a neurodegenerative disease characterized by the large accumulation of a-synuclein, an abnormal protein in the central nervous system. We have found that the absence of P62 in the autophagy pathway leads to the aggregation of a-Synuclein, And P62 is an important protein which connect membrane protein LC3 and the target protein. Medicine focus on this aspect may be an effective way to control the PD process. Previous studies have suggested that the autophagy pathway is closely related to P62, and P62 is closely related to α-Syn. We also found that the value of P62 and α-Syn are decreased after Chinses medicine treatment of PD rats with Zhichan Soup , but the pathway has not been fully defined. From the perspective of Chinese medicine, endogenous evil hot phlegm blood stasis of the real self-cleaning is similar with the abnormal protein metabolism by autophagy pathway to maintain the balance of the internal environment. On the basis of this project, we will further study the function of the Zhichan Soup on improvement of the internal environment, strengthen the function of autophagy. We also try to explore the association between P62-LC3 and α-Syn, and clarify that Zhichan Soup can adjust the autophagy , decrease the value of a-Syn through P62-LC3.

PD是以α-Synuclein这个异常蛋白在中枢神经系统大量积聚为特征的神经退行性疾病，而我们已发现，自噬途径中由于P62的缺失会导致α-Synuclein的聚集，P62是作为连接自噬体膜蛋白LC3与目标蛋白的重要蛋白，针对这方面相关靶点的药物，可能是控制PD进程的有效途径。前期研究提示了自噬途径与P62，P62与α-Syn的密切关联，并且也发现了止颤汤治疗PD大鼠后P62与α-Syn有所下降，但其作用途径还未完全确定。从中医角度，内生邪热痰浊瘀血之实邪的自我清除，与自噬途径代谢异常蛋白以维持内环境的平衡的机制是相一致的。本项目将在此基础上进一步研究止颤汤改善内环境，加强自噬的功能，探讨P62-LC3与α-Syn的关联，明确止颤汤调节自噬状态，通过P62-LC3发挥对α-Syn的降低作用。

帕金森病（Parkinson’s disease, PD）是最常见的慢性神经系统退行性病变之一，突变的a-Syn如没有被及时清除，导致在细胞内聚集，形成寡聚体，就会发生PD，开发针对a-Syn及其相关靶点的药物，可能是控制PD进程的有效途径。为进一步探讨中医药对于帕金森病大鼠代谢途径的干预，阐述p62-LC3介导的自噬途径与a-Syn的关系，故本课题拟用帕金森病大鼠模型为对象，观察自噬体，并用止颤汤进行治疗，观察大鼠LC3、p62及a-Syn的含量变化，揭示止颤汤对自噬状态，以及通过p62-LC3对a-Syn的调节作用，同时通过网络药理学，寻找止颤汤各中药成分作用靶点，进行体外进一步验证。结果提示：在体内实验中，行为学检测提示，止颤汤干预后，PD大鼠中央活动时间、中央活动距离、排便及总路程有改善；电镜下见模型组自噬少，细胞损伤严重，用药后改善；免疫荧光提示：a-Syn、p62在模型组表达升高，中药组改善，接近对照组，LC3在模型组表达降低，中药组改善，接近对照组；WB结果提示，a-Syn、p62在模型组表达最高，药物组次之，对照组更次之，说明动物模型造模成功；LC3在模型组表达最低，药物组与对照组相仿，均较模型组表达明显增加，提示a-Syn与LC3呈现负联动，与p62呈现正联动；网络药理学提示：作为调节细胞凋亡和自噬平衡的关键分子，BCL-2是止颤汤最有潜力的靶标；细胞实验中，进一步验证了止颤汤改善了PD大鼠的自噬，同时抑制凋亡来促进自噬，改善PD大鼠的症状。故通过体内外实验及网络药理学，我们进一步验证，止颤汤可改善PD大鼠症状，同时调整了p62-LC3介导的自噬途径，减少了a-Syn的表达，并抑制凋亡，从而发挥治疗PD的作用。