调节性自然杀伤细胞在重型再生障碍性贫血免疫发病机制中的作用

In recent years, the close relations between severe aplastic anemia (SAA) and immune pathogenesis have been proved by amounts of researches . Regulatory NK cells are one of important NK cell subgroups that are newly discovered to participate in immunoregulation, yet their roles are not so clearly in the immunologic mechanisms of SAA. Our previous researches have revealed that regulatory NK cells are decreased in patients with SAA, and might take a prominent part in the etiology mechanisms. Based on previous work, we intend to investigate regulatory NK cells’ roles in SAA immunologic mechanisms. Our research contents are as follows: ①Analyze the amount and function of regulatory NK cells, and the correlations between regulatory NK cells and other immunocytes. ②Analyze regulatory NK cells’ influence on the immunoregulation in SAA patients in vitro. ③Analyze the effects of altered amount and function of regulatory NK cells on clinical features, pathology, severity and immune status in SAA, by using IL-2R inhibitor and the technology of NK amplification. This research will lay an experimental base for targeted treatment of regulatory NK cell in SAA.

近年大量研究显示重型再生障碍性贫血（SAA）发病与免疫异常密切相关。调节性NK细胞是新近研究提出的参与免疫调控的重要NK细胞亚群，但其在SAA免疫发病过程中所发挥的作用尚不明确。申请人近年来主要参与SAA免疫发病机制的研究，前期研究发现调节性NK细胞在SAA患者中呈现数量减少，且可能在SAA发病中发挥了重要作用。本次课题研究拟在前期研究工作的基础上，以SAA患者及SAA小鼠模型为研究对象，对调节性NK细胞在SAA免疫发病过程中的作用进行深入探索。①分析SAA患者及SAA小鼠模型中调节性NK细胞的数量、功能及与其他免疫细胞之间的相互作用；②细胞模型检测调节性NK细胞对SAA患者的免疫调控作用；③应用IL-2受体拮抗剂及NK细胞扩增技术，揭示改变调节性NK细胞的数量与功能，对SAA临床、病理、疾病严重程度、免疫状态的影响。此研究将为应用调节性NK细胞治疗SAA奠定实验基础。

重型再生障碍性贫血（SAA）是免疫介导的骨髓衰竭性疾病。申请人在发现NK细胞在SAA疾病中数量和功能发生变化的基础上，进一步探索调节性NK细胞在SAA患者和动物模型免疫发病过程中所发挥的作用，同时，我们放眼于NK细胞的调节功能，通过筛选SAA患者NK细胞的差异蛋白表达以及探讨NK细胞TIM3表达，为进一步完善SAA免疫发病机制及提高疗效提供新的诊疗思路。由此，我们得到如下结论：①SAA患者及动物模型中均验证调节性NK细胞数量显著减少，其细胞处于激活状态；产生Ⅰ型细胞因子减少，Ⅱ型细胞因子增多，可能起到调节SAA疾病状态的作用；②SAA患者NK细胞可参与调控CD4+ T细胞分化、抑制CD8+ T细胞免疫亢进和下调mDC激活状态的能力，从而发挥调节作用；③SAA患者外周血NK细胞TIM3表达率减低，TIM3表达越低，SAA患者病情越重；④体外培养发现TIM3— NK可以抑制mDC功能及促进K562细胞凋亡，TIM3低表达可以增强NK细胞功能，抑制SAA患者免疫激活状态；⑤通过蛋白质谱，我们分析了SAA患者NK细胞在细胞组分、生物学过程、分子功能方面与正常对照组存在的明显差异，从而为SAA免疫异常提供依据；⑥我们成功构建了AA小鼠模型，特别注意的是，回输NK细胞有益于AA小鼠疾病恢复；⑦在AA动物模型中，我们验证了多种免疫抑制及促造血治疗对其免疫状态的影响，结果表明CsA联合艾曲波帕协同治疗具有最佳效果；⑧AA小鼠模型NK细胞TIM3表达减低，CsA联合TIM3— NK细胞输注治疗后AA小鼠骨髓造血得到明显恢复。综上，本研究进一步补充了SAA的免疫发病机制理论并为提高SAA疗效提供了新思路。