基于“肠道菌群-TLRs”途径探讨健脾温阳针法治疗单纯性肥胖症的良性调控机制

Obesity is associated with gut microbiome and toll-like receptors (TLRs), but it is lacks in-depth study in Chinese medicine. On the basis of the previous project research, the study explores the benign regulation mechanism of intestinal flora and TLRs pathway in obese mice by acupuncture tactics of Jian-Pi-Wen-Yang. A total of 60 obese mice with feeding high-fat diet were established and randomly divided into acupuncture group and model group. Acupuncture group was pinprick Tianshu (ST25), Guanyuan (CV4), Zusanli (ST36) and Sanyinjiao (SP6) and other points. Then, 6 mice were randomly selected from each group at 3, 7, 14, 21, and 28 days to detect obesity signs, hormone levels, immune molecules function, and TLRs distribution in Peyer's Patch (PP) of the middle of the small intestine and colon. The expression level of TLR2, TLR4, TLR5 gene was detected by quantitative PCR; the sensitivity and method of introducing Native Page and Western Blotting were used to determine the content and activity of TLRs, IRF3, TRAF6 and MyD88; using metagenomic analysis to research the structure and function changes of intestinal flora. This study could reveal the dynamic regulation mechanism of intestinal microbiome and TLRs pathway in obese mice by acupuncture, establish a new platform for traditional Chinese medicine to adjust the gut microbiome and TLRs pathway and create a new theory to regulate the that pathway by acupuncture.

单纯性肥胖症与肠道菌群及Toll样受体（TLRs）密切相关，但是缺乏中医药的深入研究。在前期项目研究基础上，本课题基于“肠道菌群-TLRs”途径探讨健脾温阳针法治疗肥胖鼠的良性调控作用。复制营养性肥胖鼠60只，随机均分成针刺组和模型组，针刺组针刺天枢、关元、足三里及三阴交四穴。在治疗的3、7、14、21、28天等时间窗口，随机选取6只小鼠，检测肥胖体征、激素、免疫分子、TLRs在小肠及结肠中段派氏淋巴结的分布密度。通过定量PCR法检测TLR2、TLR4、TLR5等基因表达水平；Native Page、免疫印迹法测定TLRs及下游关键因子IRF3、TRAF6及MyD88等蛋白含量与活性；宏基因组学分析肠道菌群结构及功能的差异变化。本课题将揭示针刺减肥调控“肠道菌群-TLRs”途径的机理，搭建中医药调整“肠道菌群-TLRs”途径研究的新平台，建立针刺良性调控“肠道菌群-TLRs”途径的新学说。

肥胖已经成为全球公共卫生难题之一。本课题基于“肠道菌群-TLRs”途径探讨健脾温阳针法治疗肥胖鼠的良性调控作用，研究针刺调节肥胖鼠肠黏膜PP上的TLRs细胞分布模式及动态调控机制；研究TLRs下游关键调控因子IRF3、TRAF6及MyD88等含量与活性的动态变化规律；研究针刺对肥胖鼠肠道菌群结构和功能基因的动态调整规律。.课题组用四年的研究时间复制建立营养性肥胖模型，针刺干预后，显著减低肥胖鼠体重、Lee’s指数及血清LP、ADPN含量水平，显著降肠黏膜上炎症因子（IL-6，TNF-α）的含量，减缓慢性炎症反应；针刺具有良性调节肠黏膜上TLR2及TLR4蛋白分布密度的作用，下调TLR2、TLR4、TRAF6等基因相对表达量，下调MyD88等基因相对表达量，调整TLRs/TRAF6的信号通路改善肠黏膜免疫功能紊乱，降低肠黏膜慢性炎症反应。基于16S rRNA基因测序结合高效液相色谱-质谱代谢的综合方法，通过调节肠道菌群的相对丰度及其与生物标志物候选物的关系，研究针刺对高脂肪饮食诱导的肥胖的影响。经电针治疗后，共检出10个明显改变的细菌属和11个代谢产物，均恢复到正常水平。肥胖鼠肠道菌群中Muribaculaceae、Lachno - 8spiraceae、Desulfovibrionaceae、Helicobacteraceae、Prevotellaceae、Ruminococcaceae、Rikenellaceae、Deferribacteraceae、Bacteroidaceae和Tannerellaceae的相对丰度有显著变化。潜在的主要生物标志物包括LysoPC（0:0/16:0）（F1）、PC（0:0/18:0）（F2）、Cholic acid（F3）、LysoPC（16:0） （F4），3a,6a,7b-三羟基-5b-胆酸（F5）， 5beta-Cyprinolsulfate（F6）、PC（18:0/0:0）（F7）、1-Nitro-5-hydroxy-6-glutathi olyonyyl -5,6-二氢萘（F）、糖胆酸(F9)、 l-精氨酸（F10）和Gulonic acid （F11）。.针刺减肥与肠黏膜的慢性炎症及肠道菌群的稳态都存在着紧密联系，这为进一步研究攻克肥胖提供实验方面的科学依据，也为传承推广针灸疗法作出贡献。