基于EMT/MET失衡参与肝纤维化研究“髓失生肝”的病因病机

肝纤维化是严重危害人类健康的疾病，迄今没有令人满意的治疗方法。"髓失生肝"是我们在继承生机学说的基础上，创新"肝主生发"的肝藏象理论而提出的中医肝脏疾病的关键病因病机。本项目在前期工作的基础上，围绕肝纤维化状态下肝组织再生过程中存在"EMT/MET动态失衡"和"髓生肝/髓失生肝动态失衡"机制的科学假说, 从临床标本、动物模型和细胞模型三个不同的方面，以及组织、细胞和分子三个不同的层次，采用细胞分子生物学的研究方法探讨EMT/MET动态失衡在肝纤维化病程进展中的作用，同时观察地五养肝方对EMT/MET动态失衡的干预作用及机制，从而较为全面和深入地从EMT/MET动态失衡角度揭示肝纤维化"髓失生肝"病因病机的生物学基础，以及"补肾生髓成肝"调控"髓生肝/髓失生肝动态失衡"防治肝纤维化的生物学基础，以求实现中医病因病机理论的突破与创新。

肝纤维化是肝脏对慢性损伤的一种病理性修复反应，也被视为是一种异常的肝再生过程。“髓失生肝”是我们在继承生机学说的基础上，创新“肝主生发”的肝藏象理论而提出的中医肝脏疾病的关键病因病机。本项目在前期工作的基础上，围绕肝纤维化状态下肝组织再生过程中存在“EMT/MET动态失衡”和“髓生肝/髓失生肝动态失衡”机制的科学假说，从临床标本、动物模型和细胞模型三个不同的方面，以及组织、细胞和分子三个不同层次展开研究。我们首先对比研究了临床上“补肾生髓成肝”（地五养肝胶囊，DWYG）治疗前后e抗原阴性慢性肝炎患者肝组织中EMT/MET和纤维化病理分级的变化，结果显示在“髓失生肝”状态下肝纤维化的发生发展过程中存在EMT/MET失衡，而DWYG可以通过抑制EMT，促进MET，减轻肝组织纤维化的程度。为了阐明EMT/MET失衡在肝纤维化“髓失生肝”中的作用，以及“补肾生髓成肝”对EMT/MET失衡的调控机制，我们分别建立了CCl4诱导的正常大鼠和MSG-大鼠肝纤维化模型，并给予DWYG进行预防性治疗。结果显示DWYG可以通过调控纤维化肝组织中EMT/MET平衡（抑制EMT而促进MET）而抑制CCl4诱导的肝组织胶原沉积，发挥抗纤维化的效应，且这种效应与逆转纤维化大鼠肝组织TGF-β1/BMP-7比值和抑制纤维化肝组织中过度活化的Hedgehog信号通路相关。进一步，我们分别以大鼠原代HSC和HSC-T6细胞为模型，探讨“补肾生髓成肝”（DWYG含药血清）对静止态HSC活化过程中EMT/MET以及活化态HSC生物学活性的影响，结果显示DWYG含药血清可以抑制静止态HSC的活化，并下调活化态HSC异常的间质细胞特性，且这种效应与DWYG含药血清通过抑制HSC中异常活化的Hh信号通路而调控EMT/MET（抑制EMT和促进MET）相关。以上结果提示，EMT/MET失衡是肝纤维化“髓失生肝”病因病机的重要生物学基础之一，而“补肾生髓成肝”可以通过调控EMT/MET失衡（抑制EMT和/或促进MET）改善“髓失生肝”从而防治肝脏病证。