“P53-PinX1通路”的确立及其在HPVE6促进宫颈癌端粒酶活性中的作用及机制研究

Human papillomavirus E6 oncoprotein (HPVE6) plays an important role in the carcinogenesis and development of cervical cancer. HPVE6 can downregulate P53 and enhance telomerase activity, but it is unclear whether there is relationship between the two events. Previous reports have shown that PinX1(Pin2/TRF1-interacting protein X1) is a powerful telomerase inhibitor. Our preliminary data showed that P53 enhanced the transcriptional activity of PinX1 gene promoter in human cervical cancer cells, and silence of HPV16/18E6 resulted in the upregualtion of both P53 and PinX1. In the present study, we will screen and identify the exact binding site of P53 in the 5′flanking region of PinX1 gene in order to confirm that PinX1 is a novel target gene of P53, which will reveal the existence of P53-PinX1 pathway in human cervical cancer cells. Subsequently, we will clarify that suppression of P53-PinX1 pathway is a novel mechanism in HPVE6-mediated total enhancement of telomerase activity in cervical cancer. Moreover, we will elucidate the significance of the novel mechanism in HPVE6-mediated total enhancement of telomerase activity. The anticipated results of the present study may provide novel helpful information for detailed exploring the relationship between HPVE6 and the increasement of telomerase activity, and may pave a way for designing novel strategy to the prevention and treatment of cervical cancer by targeting the novel pathway"HPVE6→P53 suppression→PinX1 downregulation→enhancement of telomerase activity".

HPVE6在宫颈癌发生发展过程中起重要作用。HPVE6既可下调P53，又可促进端粒酶活性，但两事件之间有无关联尚不清楚。另有研究表明PinX1是端粒酶的强效抑制分子。我们前期发现，在宫颈癌细胞中P53可促进PinX1基因启动子的转录活性，沉默HPV16/18E6可明显上调P53和PinX1。基于此，本项目拟首先解析出P53在PinX1基因5＇调控区中的具体结合位点，率先证实PinX1是P53的新靶基因，从而揭示宫颈癌细胞中"P53-PinX1通路"的存在；进而明确HPVE6通过抑制"P53-PinX1通路"而促进宫颈癌端粒酶活性是HPVE6促端粒酶活性的一个新机制，并阐明该新机制在HPVE6的总体促端粒酶活性作用中的重要性，为全面揭示HPVE6与端粒酶活性的关系提供新的理论资料，为探索针对"HPVE6→P53下调→PinX1下调→端粒酶活性升高"这一全新通路的宫颈癌防治新策略提供科学依据。

人乳头瘤病毒E6原癌蛋白（HPVE6）在宫颈癌的发生发展过程中发挥了重要作用；HPVE6既可下调抑癌分子p53，又可促进端粒酶活性，但两事件之间有无关联，目前尚不清楚。另有研究显示，PinX1（Pin2/TRF1-interacting protein X1）是端粒酶的强效抑制分子。在本研究项目中，我们的主要发现包括：①经实时定量PCR和免疫印迹实验，证实HPVE6在宫颈癌细胞中可抑制PinX1和p53的表达，而p53则可促进PinX1的表达；②经荧光素酶报告基因检测、电泳迁移率变动分析实验 (EMSA)、超EMSA和染色质免疫沉淀实验，证实p53可直接结合于PinX1基因的5′-调控区，进而促进PinX1的表达，表明PinX1是p53的一个新靶基因，即在宫颈癌细胞中存在“p53-PinX1通路”；③经RNA干扰实验，证实HPVE6下调PinX1的表达是通过抑制p53的表达而实现的；④经端粒酶活性分析和端粒长度检测实验，证实在宫颈癌细胞和癌组织标本中，HPVE6均可通过抑制“p53-PinX1通路”而促进端粒酶活性；⑤经细胞增殖实验，证实HPVE6可通过抑制“p53-PinX1通路”而促进宫颈癌细胞增殖。综合以上发现表明，通过抑制“p53-PinX1通路”而促进宫颈癌细胞端粒酶活性是HPVE6促端粒酶活性的一个新机制，其为全面揭示HPVE6与端粒酶活性的关系提供了新的理论资料，为探索针对“HPVE6→p53下调→PinX1下调→端粒酶活性升高”这一通路的宫颈癌防治新策略提供了科学依据。. 此外，本项目还取得了如下研究结果：①在宫颈癌及癌旁组织中发现，DNA甲基转移酶1（DNMT1）、DNMT3a和DNMT3b的表达水平与HPV感染呈正相关，提示HPV感染可能与这三种DNMT的表达水平升高有关；②证实塞来昔布和二甲双胍可增敏二氯乙酸盐对宫颈癌和卵巢癌细胞的杀伤作用，该发现为探索针对这两种肿瘤的治疗新策略提供了线索；③发现SARI（suppressor of AP-1 and regulated by IFN）可通过抑制AP-1的转录活性而下调抗凋亡分子Mcl-1的表达，进而诱导宫颈癌细胞凋亡，该发现为揭示SARI在宫颈癌中的意义提供了新的理论资料。. 就以上有关研究结果已发表期刊论文5篇（其中2篇被SCI收录）、会议论文1篇。