人载脂蛋白CIII引发小型猪动脉粥样硬化致病机理的研究

Atherosclerosis and its compilations are currently responsible for the "First Killer"in our worldwide, and hypertriglycridemia is the predominant cause for atherosclerosis. Miniature swine may be the most appropriate animal model because its cardiovascular system closely resembles that of human. The important role of apolipoprotein CIII is to modulate plasma lipid concentrations, and our preliminary experiment suggested that the self-established hypertriglycridemia miniature swine overexpressing human apolipoprotein CIII prefers to developing atherosclerosis,however,the specific mechanism involved in these responses to apoCIII is un resolved. In this study, we are going to use hypertriglycridemia miniature swine to induce atherosclerosis, then its pathology will be detected. Genechip will be employed to investigate the different expression patterns in aorta plaque , while the preferentially expressed gene will be validated in order to analyze signaling networks regulated by apoCIII in process of atherosclerosis. The results would provide new theoretical bases for highlighting the function of apoCIII and its role on atherosclerosis. Furthermore, this founding should be theoretical meaning for elucidating the cause of disease and pathologic mechanism. Ultimately, it would be medical sense to exert on gene therapy and new drug.

动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）及其并发症是导致人类死亡的"头号杀手"，而高脂血症是AS发生的主要诱因。小型猪因其心血管系统与人类极其相似，是研究AS的理想模型动物。载脂蛋白（apo）CIII对调节血浆脂质水平起重要作用，我们在研究自主建立的高表达人apoCIII高脂血症小型猪中发现其易发生AS，但apoCIII致AS发生的具体机制尚未明确。本研究将在前期工作基础上，利用高表达人apoCIII转基因小型猪诱发AS，并对其进行病理指标检测，利用基因芯片对主动脉斑块处的差异表达基因进行筛查，并对获得的主要差异表达基因进行验证，解析apoCIII介导AS发生的关键信号调控网络。研究结果可为揭示apoCIII功能及其在AS发生过程中的作用提供新的理论依据，对揭示AS的病因、发病机理，探讨基因治疗方法以及进行新药研发等具有重要的理论意义和医学价值。

理解apoCIII在血管内皮细胞及平滑肌细胞中的功能及作用机制，可为揭示apoCIII在动脉粥样硬化发生过程中的作用提供新的理论依据。本项目利用高通量测序技术获得apoCIII刺激前后血管内皮细胞的差异表达基因，对apoCIII介导的信号通路进行深入探讨。.利用酶解法成功分离猪血管平滑肌细胞与内皮细胞并进行体外培养，通过免疫荧光技术对细胞纯度进行鉴定，结果显示细胞纯度较高。.通过对apoCIII处理组与对照组进行转录组测序，得到大量数据，对这些转录组数据进行比较分析，获得647个差异表达基因，其中上调基因390个，下调基因257个。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测表明，高通量测序数据结果正确可靠。GO及Pathway分析结果显示，差异表达基因的功能涉及免疫应答、细胞凋亡及死亡等。这表明apoCIII可通过炎症反应、细胞黏附、细胞凋亡等分子通路影响猪主动脉血管内皮细胞的生理功能。.对差异基因进行分析，发现TLR10基因mRNA表达水平呈现较高的变化趋势。敲减TLR10后，发现一些促炎细胞因子如IL6、IL-1α等mRNA表达量随着TLR10表达量的下调而下调。这表明apoCIII可能通过TLR10调控内皮细胞炎症反应的发生，从而引发动脉粥样硬化的发生。.本研究结果系统了解了apoCIII在血管内皮细胞中的作用及其调控网络，为解析apoCIII对动脉粥样硬化形成的分子机制提供理论基础。截至目前，在本项目的资助下，发表中文核心论文1篇（已录用），已投稿SCI一篇，正在撰写 SCI研究论文2篇，协助培养博士1 名，硕士1名。