TRPC6-ILK在足细胞损伤致肾小球硬化中作用机制的研究

足细胞损伤后导致的其数目减少是肾小球硬化发生发展的重要原因，因此抑制足细胞的损伤是延缓进入肾衰竭的重要措施。TRPC6在包括局灶性节段肾小球硬化症在内的多种肾脏疾病中表达上调，且表达上调的TRPC6可通过介导的钙离子内流增加参与血管紧张素II诱导的足细胞凋亡，过表达的TRPC6可造成足细胞骨架排列紊乱，解聚。另有研究显示足细胞中ILK活性增高与细胞骨架、细胞外基质分泌、细胞转分化等有关，而钙离子内流与ILK的活性升高有关，因此在足细胞损伤中，TRPC6可能通过ILK介导一系列改变参与肾小球硬化的发生发展。本研究拟证实在足细胞损伤过程中，表达上调的TRPC6可能通过其介导的钙离子促使ILK的表达和活性增高，导致足细胞骨架紊乱、分泌细胞外基质蛋白增多、细胞间连接蛋白减少或异常分布，最终使足细胞损伤加重，数目减少，细胞外基质增多，从而在肾小球硬化发生发展中起重要作用。

足细胞损伤后导致的其数目减少是肾小球硬化发生发展的重要原因，因此抑制足细胞的损伤是延缓进入肾衰竭的重要措施。已知钙离子内流与ILK的活性升高有关，因此在足细胞损伤中，TRPC6可能通过ILK介导一系列改变参与肾小球硬化的发生发展。.本研究拟检测肾脏疾病患者肾穿刺活检中硬化肾小球内TRPC6和ILK的表达，通过体内外实验观察TRPC6通过介导的钙离子对ILK及下游的Fn、MMP9等的影响。.研究结果：1、TRPC6主要表达于足细胞中，在疾病组织肾小球中的表达明显高于正常肾脏（P值均<0.05）。ILK在局灶节段性肾小球硬化症、狼疮性肾炎及糖尿病肾病的ILK表达明显高于正常肾组织（P值均<0.05）。在局灶节段性肾小球硬化症及糖尿病肾病中，ILK与TRPC6表达呈正相关（r=0.906，P=0.000；r=0.694，P=0.004）。2、体外实验中，与对照组相比，阿霉素（ADR）组中TRPC6、ILK、Fn和MMP表达明显升高（P＜0.05），ZO-1表达明显下降。shRNA抑制TRPC6表达后，ADR+shRNA-TRPC6组的ILK、Fn和MMP表达明显下降（P＜0.05），ZO-1表达上升，通过钙离子拮抗剂SKF96365抑制钙离子活性剂TRPC6表达后，与ADR组相比，ADR+SKF96365组中ILK、Fn和MMP9表达明显下降（P＜0.05），ILK活性明显增强。3、与正常对照组相比，ADR肾病大鼠模型（4周）组肾皮质中TRPC6、ILK、Fn和MMP的表达明显增加（P＜0.05），ADR+SKF96365（60ng/kg）组同ADR（6.5mg/kg）组相比，TRPC6、ILK、Fn和MMP表达明显下降（P＜0.05），24小时尿蛋白定量明显减少。.本研究同时在多种肾脏疾病的肾穿刺标本中同时检测了TRPC6和ILK的表达变化，证实它们共同参与了肾小球硬化的发生。利用体外实验将TRPC6和ILK联系在一起，从表达和功能两个层面证实表达上调的TRPC6通过其介导的钙离子内流增加可能提高ILK的表达及活性，导致足细胞损伤，参与肾小球硬化。为丰富对足细胞损伤分子机制的理解，如何抑制足细胞损伤，保持足细胞功能提供了潜在靶点。同时在大鼠模型中证实了小分子钙离子抑制剂SKF96365可有效减少蛋白尿，为以TRPC6为靶点治疗蛋白尿提供了理论基础。