HIV人源基因工程抗体的研究

以人工合成HIV-1gp120V3环多肽为抗原，利用噬菌体抗体库技术，筛选含有抗-gp120ScFv基因的噬菌体，提取质粒，转化大肠杆菌HB2151，成功地表达了抗HIV-lap120噬菌体抗体和可溶性ScFv.经SDS-PAGE和Western Blot分析，表达产物分子量为28KDa左右，且具有c-myc活性；ELISA和DotBlot结果表明，可溶性scoff具有较好的抗原结合活性和较强的特异性；竞争性ELIAS实验结果进一步证明表达产物的特异抗-gp120活性。该技术便捷有效，可大量获得人源抗HIV抗体片段，为进一步研究HIV抗体的生物活性和在HIV感染诊治打下基础。本文系统地报道了噬菌体抗体库技术在人源抗HIV-1基因工程单克隆抗体研制中的应用。我们以RT-PCR从HIV-1感染者外周血淋巴细胞扩增体轻重链可变区基因，插入载体pCOMB3,建立噬菌体抗体库。分别以HIV-1gp11、gp120和gp160为固相抗原经过多轮筛选，从中获得多株抗HIV-1GP11 gp120和gp160的单克隆抗体Fab段基因。抗HIV特异性噬菌体抗体随抗体库的筛选高度富集，抗gp41阳性克隆率由第2轮的5%增加到第6轮的87%。间接ELIAS、竞争抑制ELIAS和Dot Blot检测结果表明，获得的抗HIV-1噬菌体抗体具有较高抗原结合活性和特异性。研究结果显示应用该技术获得人源抗病毒基因工程单克隆抗体，省时省力，可获得任意目的单抗基因，且易获得高亲和力的抗体。