个体促超排卵结局的遗传机制研究

FSH和GnRH是广泛用于不孕症促超排卵（COH）的外源性促性腺激素。临床发现COH结局差异较大，可能是FSH和GnRH作用相关基因变异所致。故本课题拟采用Pyrosequencing技术，分析中国人群FSHR SNPs的分布特点，用PHASE Version 2.0和DnaSP Version 3.51构建Haplotype，绘制中国人群FSHR HPMap 图谱；通过病例对照研究FSHR、ESR1和ESR2的基因变异，研究遗传与非遗传因素相互对COH结局的影响。体外，利用定点突变和转基因技术，构建FSHR 1~3 个转染细胞模型，研究新发现与表型相关SNP的功能意义。体内、体外研究相结合阐明个体COH结局差异的遗传机制，确定预测COH结局的分子标记物，建立定量模型为临床依据基因特征、年龄等非遗传因素拟定不孕症患者最佳外源性促性腺激素剂量，提高妊娠率、降低OHSS发生率提供理论依据。

本项目纳入了行IVF/ICSI、年龄为18-40岁中国妇女626例，采集废弃血标本，依据自行改良方法提取DNA。用Sanger法对FSHR基因全部10个外显子、启动子和ESR1的全部8个外显子、启动子进行测序。Lasergene 7.0 软件对测序的结果进行分析。对基因频率大于5%的SNPs则进行连锁平衡分析、单倍型域和单倍型构建。首次在中国人群中大样本筛选FHSR基因SNPs并确定其频率，共发现7个SNPs，包括3个新的位点（-1821G>A，ss475871789 PKUTDMCT|NM_000145.3:c.-1821G>A；-1468G>A，ss475871788，PKUTDMCT|NM_000145.3:c.-1468G>A 和 *211 T>C，ss475871790 PKUTDMCT|NM_000145.3:c.*111T>C）；突变等位基因发生频率分别为：-1821G>A 76.3%，-1468G>A 48.7%，-29G>A 51.2%, 24G>T 0.5% , 919G>A 28.8%, 2039G>A 25.4% 和*111 T>C 4.6%；连锁不平衡分析显示rs6165与rs6166两位点存在强的连锁不平衡（|D’|=0.924; r2=0.72）。AA单倍型占绝大部分，频率为69.8%。100例ESR1全基因组测序共确定了14个SNPs（ -215 C>G 50.5%，-264 T>C 35.50%，-671 C>A 4.59%，-229 G>A 24.50%等） .本项目研究了FSHR基因变异与IVF/ICSI结局相关性部分，共纳入546名接受体外受精的妇女，通过单因素方差分析，以年龄、BMI为协变量，以FSHR SNPs为变量，我们的研究发现BMI，exon 182、promoter 533 以及 exon 182 * 1345 T>C in exon10、1345 T>C in exon10 * promoter 533 对患者基础FSH水平有显著性影响（P=0.03、0.034、0.018、0.018、0.028）。采用有序多分类的LOGISTIC回归对患者发生卵巢过度刺激综合症（OHSS）的风险进行分析，发现919G>A位点与OHSS发生率显著相关，P=0.027。