Pharicin B稳定维甲酸受体的机制研究

维甲酸受体a（RARa）是重要的造血调控转录因子。在急性早幼粒白血病（APL），由于染色体易位，几乎都存在与RARa融合的异常基因如PML-RARa的表达。ATRA主要通过影响RARa而引起RARa和PML-RARa的降解，但具体机制还不清楚。我们最近在Blood杂志上报道小分子化合物Pharicin B 能够稳定RARa和PML-RARa，抑制ATRA引起的RARa和PML-RARa的降解，促进APL细胞分化。进一步研究显示，Pharicin B 的效应与ROS密切相关，Pharicin B 可能通过直接作用于氧化还原蛋白，改变细胞内ROS水平进而引起RARa稳定。本课题拟以 Pharicin B 作为探针，明确其作用靶蛋白及其与靶蛋白的相互作用方式，揭示RARa降解的分子机制，并在此基础上设计合成和筛选新的具有RARa稳定效应的化合物，为进一步提高ATRA效应、扩大其应用范围提供工具。

冬凌草甲素是从冬凌草中分离的二萜类化合物，已被证明在多种恶性疾病中发挥生物学效应。我们课题组曾报道：在急性早幼粒细胞白血病（APL）中，冬凌草甲素可以升高RAR蛋白水平，增强全反式维甲酸（ATRA）的分化效应，并能够诱导活性氧（ROS）引发的细胞凋亡。在此基础上，我们研究了冬凌草甲素稳定RAR蛋白的具体机制，探究了ROS和NF-B信号通路在RAR稳定性和细胞分化中的作用。这项工作主要取得了以下成果：.（1）首先，冬凌草甲素在APL细胞系和原代白血病细胞中，从转录后水平，明显地上调RAR的蛋白水平。并且冬凌草甲素所稳定的RARa蛋白可以增强ATRA的转录激活能力。.（2）冬凌草甲素通过升高细胞内的ROS水平，稳定RAR。抑制细胞内的ROS水平，可以阻断冬凌草甲素的作用。另外，外源性的H2O2同样可以稳定RARa蛋白。.（3）ROS激活的NF-B信号通路介导了冬凌草甲素稳定RAR的作用。通过使用通路抑制剂以及基因敲除技术，我们证实p65蛋白在冬凌草甲素稳定RAR的过程中至关重要。.（4）p65的核转位可以稳定RAR蛋白。冬凌草甲素通过促进p65核定位上调RAR蛋白。另外，使用其他NF-B通路激活剂或抑制p65的出核，可以模拟冬凌草甲素稳定RAR蛋白的效应。.（5）在APL细胞中，冬凌草甲素和ATRA的协同诱导分化作用，依赖活性氧p65信号通路的介导。清除活性氧或敲除p65，会抑制p65的核定位，从而阻遏冬凌草甲素/ATRA在NB4细胞中的协同诱导分化作用。