miR-29调控TGF-β1与COLI基因表达在增生性瘢痕形成中的作用及机制

创伤后增生性瘢痕（HS）发病率高、危害大，其病理本质是以胶原为主的细胞外基质的过度合成，是一种纤维化疾病。对多种纤维化疾病的研究表明，miR-29可在转录后水平抑制胶原基因表达，对纤维化的发生起抑制作用。课题组前期实验发现，HS组织中miR-29表达显著降低，生物信息学预测显示miR-29对转化生长因子β1（TGF-β1）和I型胶原（COLI）基因存在潜在的调控作用。结合文献及前期工作，我们推测：创伤愈合后局部低水平的miR-29丧失了对TGF-β1和COLI转录后的有效抑制，从而促进了HS的形成。本研究将构建miR-29过表达及反义表达载体，以培养正常皮肤及HS成纤维细胞为研究对象，明确miR-29对TGF-β1和COLI的调控机制，并利用HS动物模型，观察miR-29正义分子对HS的防治作用。研究结果将深入阐明miR-29在HS形成中的作用及机制，并有望为HS的生物学防治提供新的靶点。

一 项目背景：.增生性瘢痕（HS）是皮肤创伤愈合后的常见并发症，但临床治疗效果不理想。我们前期对正常皮肤组织及HS组织中mircoRNA分子进行了检测分析，发现两种组织中存在包括mir29在内的多个microRNA分子的差异表达，结合生物信息学分析及相关文献报道，我们认为，低水平表达的mir29分子对ECM形成关键基因的表达调节作用失控，从而促进了HS的发生、发展。本研究以mir29对相关基因表达的调控作用为重点，探讨mir29在HS形成中的作用及其机制，研究结果一方面将加深对HS发病机理的认识，另一方面将有望为HS的防治提供新的治疗靶点。.二 主要研究内容与重要结果：.1、构建了本项目研究所需要的系统载体工具：.首先构建了本研究所需要的mir29C腺病毒，克隆了COL1A1及MMP2 3’UTR区并构建至报告载体中，并针对mir29c相应结合区进行突变构建突变载体。以及后续研究所需的COL1A1过表达载体等。.2、明确了 Mir-29,COL1A水平与临床HS形成间的关系.在细胞水平证明正常皮肤及疤痕皮肤成纤维细胞中mir29c-3p表达存在明显表达差异。继而在临床中样本中证实mir 29C-3P在疤痕成纤维细胞中的表达显著低于正常皮肤组织。与此同时，也进一步证实了COL1A1与疤痕形成间的密切关系。.3、在细胞水平阐明了Mir-29c-3p对COLⅠ及MMP2基因表达及功能的影响.在数据显示，正常成纤维细胞COL1A1 及MMP2 -3’ UTR载体活性显著高于疤痕成纤维细胞组，增强mir29c表达，则显著增强疤痕成纤维细胞COL1A1 及MMP2 -3’ UTR报告载体活性，突变载体活性测定及模拟剂刺激实验结果显示，mir29c对COL1A1 及MMP2 -3’的降解作用具有特异性。.4、探讨了Mir-29c通过调节COL1A1等基因表达促进瘢痕形成的机制.研究了mir29c调节COL1A1等基因表达对细胞生物学特性如增殖、迁移等的影响，明确了mir29C在疤痕形成中的重要作用。.三、项目科学意义：.本研究在阐明mir29c表达水平与疤痕形成相关性的前提下，明确了mir29c对COL1A1及MMP2基因表达的直接调控作用，并在此基础上以COL1A1以靶基因，探讨了mir29c在疤痕形成中的作用。研究结果深化了对疤痕形成机制的认识，为疤痕防治提供新的治疗措施