雌激素膜受体GPR30在子宫腺肌病发生中的作用及其分子机制研究

雌激素膜性受体GPR30能独立介导雌激素诱发的各种信号转导，在子宫内膜细胞周期进程及细胞增殖中起了重要作用。本研究通过对子宫腺肌病的临床样本和细胞分子生物学的整合研究，确定雌激素膜性受体GPR30表达和分布的特点，并检测GPR30基因超表达或基因沉默后相关信号通路蛋白的改变，以明确雌激素是否通过GPR30快速非基因组学效应、调控以MAPK和PI3K信号通路为代表的相关蛋白的表达，探索GPR30在子宫腺肌病EMI区和异位病灶局部产生高雌激素的分子机制；揭示GPR30介导的快速非基因组新途径在子宫腺肌病发生发展中的作用，并为子宫腺肌病的局部抗雌激素治疗提供新的干预靶点。

子宫腺肌病是一种雌激素依赖性疾病，子宫基底层内膜侵入肌层生长和高雌激素刺激密切相关，研究表明雌激素可以通过雌激素膜性受体GPR30快速激活细胞内的第二信号系统，能独立介导雌激素诱发的各种信号转导，在细胞增殖、迁移和凋亡中起了重要作用。但雌激素是否也通过GPR30介导的各个细胞内信号通路来影响子宫内膜细胞的生物学功能，从而参与子宫腺肌病的发生发展机制尚未见报道。. 本研究通过体内和体外实验观察了在子宫腺肌病中高表达的GPR30介导的雌激素非经典途径影响细胞生物学行为的变化。结果发现，（1）子宫腺肌病患者子宫在位内膜和异位病灶中的间质和腺体细胞中存在GPR30的广泛表达于子宫内膜上皮和间质细胞，主要定位于细胞膜，部分细胞浆也有表达，进一步的研究表明GPR30蛋白和mRNA均呈过表达，都高于非子宫腺肌病患者在位内膜，且子宫腺肌病患者增生期和分泌期原代培养的在位内膜细胞间质细胞和腺体细胞中均有高水平的GPR30表达；（2）成功设计重组针对人GPR30的 shRNA有效片段，包装了高滴度的慢病毒载体；并利用原代培养的人子宫内膜间质细胞，成功建立慢病毒载体感染人子宫内膜间质细胞的条件参数；并成功筛选出2条有效干扰人GPR30表达的shRNA序列；（3）GPR30 shRNA慢病毒载体分别转染子宫腺肌病原代培养的在位子宫内膜间质细胞后，与阴性序列对照组和未感染组相比，GPR30蛋白和信号通路蛋白pAkt/Akt表达均下调， pErk1/2/ Erk1/2的表达比值明显上调；并通过凋亡相关通路调节蛋白Caspase-3 Active/Pro比值、Bcl-2的表达上调和Bcl-x蛋白表达下调促进子宫内膜间质细胞的凋亡，而P53和PARP-1(cleaved p85)表达水平未见明显变化；（4）GPR30 shRNA慢病毒载体分别转染子宫腺肌病原代培养的在位子宫内膜间质细胞后，与阴性序列对照组和未感染组相比，CCK8细胞增殖实验表明子宫内膜间质细胞的增殖能力明显下降；划痕修复实验结果表明子宫内膜间质细胞的迁移能力明显受到抑制；Transwell细胞侵袭实验显示子宫内膜间质细胞的侵袭能力明显下降。这些研究结果提示，GPR30介导的雌激素非经典途径可能通过影响子宫内膜细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡等参与子宫腺肌病的病理发生和发展过程。