在葡激酶基因初级克隆的基础上,从2.75kb的含葡激酶的杂种质粒中分离掺入的片段,连接到pucBM20质粒上,再经酶功自连,得到一个2.1kb的次级克隆.对该片段进行序列分析,结果表明葡激酶结构基因由492个核苷酸组成,编码为163个氨基酸.与国内外已发表的葡激酸基因序列比较,我们分离的葡激酶基因序列有多处存在差异.根据测序结果,合成了葡激酶两端引物,以次级克隆片段为模板进行扩增.得到葡激酶结构基因,连接到高表达载体PJLA502上,转化到大肠杆菌中,菌体在LB肉渗中培养不经热诱导,可使基因产物大量表达,表达量为菌体可溶性蛋白的20%,菊激酶存在于细胞质中,不形成色染体。
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数据更新时间:2023-05-31
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