Wnt5a/Ror2信号通路在卵巢癌侵袭转移中的作用及机制研究

Ror2是属于受体酪氨酸激酶家族的一种酶联受体，可特异性的介导Wnt5a信号传递，在肿瘤的发生、侵袭转移中发挥重要作用。但目前对Ror2在肿瘤中的作用研究结论不一，其在卵巢癌中的作用未明。我们研究发现，Ror2及Wnt5a均高表达于人卵巢癌组织，并表现出随期别进展表达上升的趋势；免疫共沉淀显示Wnt5a可与Ror2直接结合，推测Ror2可能通过介导Wnt5a信号通路在卵巢癌发展中起作用。本课题拟从Wnt5a/Ror2信号通路着手，利用基因组学及蛋白质组学等技术，⑴验证Wnt5a与Ror2的相互作用；⑵观察调控Ror2表达对卵巢癌细胞增殖、侵袭转移能力的影响，寻找该通路中的信号传导分子及下游靶基因；⑶探讨靶向沉默Ror2对卵巢癌移植瘤的治疗效果及作用机制；⑷最后在不同类型人卵巢病理组织中验证筛选出的目标因子的表达。本研究试图从信号转导角度为卵巢癌的基础研究和临床治疗提供新的思路和分子靶点。

ROR2是属于受体酪氨酸激酶家族的一种酶联受体，可特异性的介导 WNT5A信号传递，在肿瘤的发生、侵袭转移中发挥重要作用。ROR2在肿瘤中的作用研究结论不一，有研究认为ROR2在肿瘤中是肿瘤抑制因子还是癌基因取决于肿瘤的类型，迄今其在卵巢癌中的作用仍不明确。本课题前期研究发现，ROR2及 WNT5A均高表达于人卵巢癌组织，并表现出随期别进展表达上升的趋势，免疫共沉淀显示WNT5A可与ROR2 直接结合，推测 ROR2 可能通过介导 WNT5A 信号通路在卵巢癌发展中起作用。本课题研究结果显示ROR2在SKOV3和A2780两种上皮性卵巢癌细胞系中均呈高表达状态，使用shRNA干扰技术降低ROR2在两种细胞系的表达对WNT5A表达无影响，但重组WNT5A蛋白可诱导ROR2表达升高，进一步验证了WNT5A/ROR2信号通路在卵巢癌中发挥作用的可能性；研究认为WNT5A可通过不同受体途径激活经典或非经典Wnt信号通路，从而发挥癌基因或抑癌基因作用，本实验结果显示，沉默ROR2基因可显著影响非经典Wnt通路：WNT/PCP 和Wnt/Ca2+信号通路中的下游效应因子RhoA, Rac1和PKC的表达，且ROR2基因沉默能够有效抑制SKOV3和A2780细胞的侵袭转移能力，并能够抑制SKOV3细胞的增殖，提示在上皮性卵巢癌中，WNT5A/ROR2介导的非经典Wnt通路发挥癌基因作用。上皮间质转化（EMT）是指上皮细胞在形态学上发生向成纤维细胞或间充质细胞表型的转变并获得迁移的能力，最新研究发现经典及非经典Wnt通路可协同作用激活乳腺细胞的EMT程序，我们进一步研究发现，沉默ROR2基因可上调E-cadherin的表达，同时下调EMT的调控因子Snail、基质金属蛋白酶 MMP9的表达，提示ROR2在上皮性卵巢癌的EMT激活过程中发挥一定作用。为验证体外实验结果，本课题进行了裸鼠成瘤实验，结果显示，shROR2-SKOV3接种组的裸鼠成瘤率及成瘤后体积较NC-SKOV3接种组均明显减少，表明敲除ROR2基因可明显抑制卵巢肿瘤的形成和生长。综上所述，我们的研究结果显示ROR2在上皮性卵巢癌中发挥癌基因的作用，促进癌细胞的侵袭转移，ROR2有望成为一种新的治疗靶向基因来抑制卵巢癌的进展。