锌指蛋白A20对根尖周炎中TLR4/TRAF6/NF-κB信号通路的调控作用研究

NF-κB是炎症反应中重要的转录因子，它的反常激活可导致多种自身免疫性疾病和炎性疾病的发生。锌指蛋白A20作为NF-κB信号系统负反馈调节因子，近年来被研究认为在免疫炎症反应中发挥重要调控作用。本课题通过获取人体病变组织标本和建立动物模型，深入研究TLR4/TRAF6/NF-κB通路在根尖周病中的作用，并选择A20作为切入点，研究A20的表达与NF-κB，以及其上游信号转导分子TLR4、TRAF6和下游炎症因子产物之间的相互关系；通过RNA干扰抑制或基因转染过表达，干预人牙周膜细胞，研究根尖周炎中A20对NF-κB信号系统的负反馈作用，以及A20干预对PDLF诱导分泌效应的影响。同时将干预后的PDLF 与破骨前体细胞建立细胞交互作用立体模型，观察其对破骨细胞骨吸收的影响。本课题研究对进一步阐明根尖周病炎症和骨破坏病理过程和深入探索根尖周炎免疫调控机制具有重要意义。

建立根尖周病动物模型，组织学方法检测根尖骨破坏面积，免疫组化检测根尖周病不同病变时期A20、TLR4、TRAF6和炎症因子IL-17、IL-23、RANKL等表达水平以及破骨细胞的表达数量。分析实验动物根尖周病变组织中炎症因子表达水平与炎症进展、破骨细胞数目以及骨破坏大小之间的关系。获取患者根尖周病变组织后通过免疫组化检测组织中A20、TLR4等的表达，同时Real time-PCR检测相关蛋白调控基因的表达。体外培养人牙髓细胞，用炎症因子IL-17、IL-1β刺激后，Real time-PCR和ELISA检测IL-6、IL-8和IL-23基因和蛋白水平的表达。基因转染过表达干预牙髓胞A20的表达，检测IL-23基因和蛋白水平的表达变化情况。从而阐明实现A20表达干预后的人牙髓细胞活化和功能状态的改变情况，以及对细胞TLR4/TRAF6/NF-κB通路介导的炎症的调控效应，以阐明其在根尖周炎变中的作用。