新转录因子SlNAC5在番茄果实成熟中的调控机理研究

Tomato is model plant to research ripening characteristics of climacteric fruit. Till now, studies related to tomato fruit ripening are mainly concentrated on ethylene signal transduction pathway, scarce reports are about upstream of ethylene regulating pathway. Based on the experiments we conducted before, function characters and action model of transcription factor SlNAC5 are studied. SlNAC5 is estimated located in the upstream of ethylene pathway based on the experiments before. The project is aimed to clarify its mechanism at molecular level. We preliminary predicated SlNAC5 plays an important role in tomato ripening using bioinformatics software and genetic transformation system. The project will analyze the physiological and biochemical characteristics of transgenic tomato. The relationship between transgenic tomato and ethylene will be detected to elucidate the biological function of SlNAC5. Biochip technology will be used. Interacting proteins of SlNAC5 will be fished using Y2H (yeast two-hybrid) system, the interacting DNA will be detected with ChIP (chromatin immunoprecitation) assay. All these work will gradually resolve tomato fruit ripening network that SlNAC5 mediated. The completion of this project will provide new instance for theoretical studies about tomato ripening mediated by ethylene upstream transcription factor.

番茄是研究呼吸跃变型果实成熟特性的模式植物。目前，国内外对番茄果实成熟的研究多集中在乙烯信号传导途径上，而对该途径上游转录因子的研究较少，致使对果实成熟机理的研究尚不系统。本项目以本实验室新发现的乙烯上游转录因子SlNAC5为对象，对其在番茄成熟过程中的功能特点和作用模式进行研究，旨在从分子水平上阐明其作用机制。项目组前期已经利用生物信息学分析和遗传转化体系，初步确定SlNAC5在番茄成熟过程中发挥重要作用。本项目将通过分析转基因番茄果实成熟的生理生化特性，进而通过研究转基因番茄与乙烯之间的调控关系，进一步揭示SlNAC5的生物学功能，最终通过生物芯片技术、酵母双杂交钓取SlNAC5互作蛋白，以及染色质免疫共沉淀检测其互作DNA来逐步解析SlNAC5介导的果实成熟网络。本项目将为乙烯上游转录因子介导番茄成熟的理论研究增添新的实例和佐证。

番茄作为一种模式植物，在研究呼吸跃变型果实成熟特性方面发挥了重要作用。目前国内外对于果实成熟的机理研究多集中在乙烯信号传导途径上，而对该途径上游转录因子的研究较少，致使对果实成熟机理的研究尚不系统。. 对获得的SlNAC5转基因番茄进行生理生化分析和基因表达分析，研究发现外源乙烯不能诱导番茄果实成熟，干涉表达转基因番茄中PE，PG2A，ACO1，ACS2，ACS4等的表达显著降低。目的基因原核表达并获得其多克隆抗体，通过免疫共沉淀和质谱分析其互作蛋白，确定了靶标蛋白通过调控多聚半乳糖醛酸酶PG-2的表达，在番茄果实的成熟过程中发挥重要作用。. 对转基因番茄果实进行GC-TOF-MS代谢组学检测分析，并对得到数据进行生物信息学分析，筛选出一系列与番茄果实成熟相关的基因，为后期果实成熟的机理研究提供了重要的研究思路和参考依据。针对代谢组学检测分析结果，选取关键基因Sl0658进行功能鉴定。Sl0658属于NAC转录因子家族。获得了Sl0658的干涉表达转基因番茄，并对转基因番茄果实成熟相关指标(包括果实乙烯释放量、果实呼吸速率、果实硬度、可溶性固形物含量等)和果实成熟相关基因表达量进行测定。Sl0658干涉转基因番茄果实呈现黄色、乙烯释放量和呼吸速率显著降低、果实硬度提高、部分成熟基因表达量降低，表明关键基因Sl0658也参与调控番茄果实的成熟过程。. 该研究在分子水平上阐明了乙烯上游转录因子SlNAC5的作用机制，系统阐明了SlNAC5在番茄成熟过程中的调控机理。为乙烯上游转录因子介导番茄成熟的理论研究增添了新的实例和佐证。