Fgf19对耳蜗毛细胞发育调控机制的研究

耳蜗毛细胞损伤是各种感音性耳聋的病理基础, 如占65岁以上30%、80岁以上90%的老年性聋、占聋哑儿42.5%的药物性聋。而目前哺乳类(包括人)耳蜗毛细胞损伤后不能再生，使其治疗成为难题。耳蜗毛细胞再生是解决问题的关键。已知鸟类（包括鸡）耳蜗毛细胞可以再生，故对鸡胚耳蜗毛细胞产生机制的研究可为哺乳类耳蜗毛细胞再生的调控提供策略。我们总结文献发现：鸡胚耳蜗毛细胞产生前后，其发育区内依次出现Fgf19、Bmp4、CHCA（耳蜗毛细胞抗原）的表达，且具有强度相关性。已知Bmp4能调控毛细胞发育，因此推论：Fgf19诱导Bmp4表达，随后由Bmp4或与Fgf19协同作用启动和调控毛细胞发育。并拟采用离体培养与活体基因干扰（RNAi）与过表达来验证上述理论的正确性，并检测Fgf19与Bmp4间是否存在直接作用关系，其结果将为基因导入或/和干细胞导入诱导耳蜗毛细胞再生治疗感音性耳聋提供理论基础。

（本项目按计划完成任务、获得实验结果，为后期研究奠定了基础）耳蜗毛细胞损伤是各种感音性耳聋的病理基础, 目前哺乳类(包括人)耳蜗毛细胞损伤后不能再生，使其治疗成为难题。而鸟类（包括鸡）耳蜗毛细胞则可再生，对鸡胚耳蜗毛细胞产生机制的研究可为人耳蜗毛细胞再生的调控提供策略。我们总结文献发现：鸡胚耳蜗毛细胞发育时，在其发育区内依次出现Fgf19（成纤维细胞生长因19）、Bmp4（骨形态发生蛋白4）、CHCA（耳蜗毛细胞抗原）的表达，且具有强度相关性，因此推论：Fgf19和Bmp4与毛细胞发育调控相关，并可能彼此具有相关性。本项目在离体培养的鸡胚耳囊组织中加入不同影响因子，通过原位杂交技术检测耳囊内Cath1（毛细胞的标记基因）和Bmp4的表达情况，发现Fgf19 与Bmp4对Cath1表达单独作用不显著，但具有明显协同作用；在拮抗Fgf19作用后，Cath1表达增强；拮抗Bmp4作用后，Cath1表达减弱；且拮抗Bmp4后，Fgf19无法补救其作用；而Fgf19可以使Bmp4表达强度明显增加。本项目还进行了Fgf19 RNAi(RNA干扰)慢病毒载体的构建，并进行了离体细胞的感染实验和活体鸡胚注射的预实验，摸索了病毒载体活体注射的方法、浓度和剂量，为其后在活体实验奠定了基础。其结果将为基因导入或/和干细胞导入诱导耳蜗毛细胞再生治疗感音性耳聋提供理论基础。