Hsa_circ_0001461促进骨肉瘤侵袭转移的分子机制研究

Tumor metastasis is the major cause of death of osteosarcoma, however the molecular mechanisms remains unknown. Our preliminary experiment revealed that circular RNA hsa_circ_0001461 played an important role in osteosarcoma invasion and metastasis. The source analysis of circular RNA showed that circ_0001461 is originated from FAT1，which contains exons creating circ_0001461 by back splicing. Fluorescence in situ hybridization detected the co-localization of circ_0001461 and miR-375 in cytoplasm. Therefore we inferred that circ_0001461 promoted the invasion and metastasis of osteosarcoma by sponging miR-375 as a potential competing endogenous RNA (ceRNA). Based on our pre-study, our group adopt in vitro (luciferase reporter assay and RIP) and in vivo (proximal tibia and tail vein injection of osteosarcoma cells, body optical imaging system) experiments to investigate the interaction between circ_0001461 and miR-375, reveal the function and mechanism of circ_0001461/miR-375 axis in osteosarcoma invasion and metastasis and provide theoretical basis and experimental evidence for the treatment of metastatic osteosarcoma.

肿瘤转移是骨肉瘤致死的主要原因，但分子机制尚不明确。课题组前期研究发现：环状非编码RNA hsa_circ_0001461与骨肉瘤的侵袭转移密切相关；环状RNA来源分析表明circ_0001461由母基因FAT1的外显子环化而成，序列分析提示circ_0001461包含可与miR-375特异结合的种子序列，而荧光原位杂交实验表明两者存在细胞质共定位。由此我们推测circ_0001461可能为一竞争性内源RNA，通过拮抗miR-375来促进骨肉瘤的侵袭转移。本课题以前期研究为基础，借助多种体外（荧光素酶报告系统和RNA免疫沉淀）和体内（胫骨转移模型、尾静脉转移模型、裸鼠活体成像）实验技术，探讨circ_0001461与miR-375的相互作用模式，揭示circ_0001461/miR-375轴在骨肉瘤侵袭转移中的功能及潜在机制，为骨肉瘤转移的预防和治疗提供理论基础和实验依据。

肿瘤转移是骨肉瘤致死的主要原因，但分子机制尚不明确。本课题以前期研究为基础，借助多种体外（荧光素酶报告系统和RNA免疫沉淀）和体内（胫骨转移模型、尾静脉转移模型、裸鼠活体成像）实验技术，探讨circ_0001461与miR-375的相互作用模式，揭示circ_0001461/miR-375轴在骨肉瘤侵袭转移中的功能及潜在机制，为骨肉瘤转移的预防和治疗提供理论基础和实验依据。研究内容、结果及数据主要包括：1．本研究首次揭示 circ_0001461 在骨肉瘤侵袭转移过程中的机制功能。2．本研究以 circ_0001461 作为竞争性内源 RNA 调控骨肉瘤的侵袭转移这一新视角来探讨骨肉瘤的进展机制，可望为以 circ_0001461/miR-375/YAP1 轴为骨肉瘤治疗新靶点提供坚实的理论基础和实验依据。3．探讨 circ_0001461 与 miR-375 的作用模式，阐明该两种非编码 RNA 以及靶基因 YAP1 在骨肉瘤侵袭转移中的功能及分子机制。 4．CircRNAs 与 Hippo 通路核心因子 YAP/TAZ 之间的关系未知，本研究探讨circ_0001461 作为 YAP1 的诱导因子发挥促癌功能，对非编码 RNA 与 Hippo 通路之间的关系这一领域研究重点进行了理论和实践补充。5.通过荧光定量 PCR 实验，利用外显子两端向外引物检测 circ_0001461 分别在正常成骨细胞系 hFOB1.19 与多种骨肉瘤细胞系（MG-63, 143B, SJSA-1, OS732, HOS）之间，以及 12 对骨肉瘤病人组织与癌旁对照组织之间的表达差异。6.利用 tagged RNA affinity purification （TRAP）技术进一步检测 circ_0001461与 miR-375 的结合情况：构建 GST-MS2 和 circRNA_0001461-MS2 表达载体，共转染细胞获得GST-MS2/circRNA_0001461-MS2与RNA或蛋白复合体，分离纯化mi RNA，通过 QPCR 检测复合物中 miR-375 的表达。7.发表相关 SCI 论文共计 13 篇，最高影响因子 27.4016分，10分以上7篇。8.培养博士生3名，硕士生4名。