MicroRNA-130a在肺动脉高压血管重构中的作用及机制研究

肺动脉高压（PAH）的主要病因是肺血管重构导致肺动脉腔隙狭窄。PAH预后较差，且缺乏有效的治疗手段。MicroRNA（miRNA）在组织细胞生长、发育、分化等方面具有重要作用。新近研究提示某些miRNA可能在PAH的发生发展中起重要作用。我们的预实验发现，PAH大鼠肺动脉miR-130a表达增高；在培养的血管平滑肌细胞miR-130a显著促进细胞增殖。本项目拟通过在体动物与细胞实验，查明miR-130a在PAH肺血管重构发生过程中的重要作用，在此基础上，在体动物与细胞实验相结合，探讨PAH发病过程中miR-130a成熟加速的原因（与Smad的关系）以及miR-130a促血管重构的机制（下游靶点GAX/BMPR2的调控）。该研究将有助于揭示PAH的发病机制，并为寻找防治药物提供新的思路。

肺动脉高压（PAH）是肺循环高血压中的一类，是指肺动脉血压增高而肺静脉压力正常，主要特征是肺血管阻力进行性升高，最终导致患者右心衰竭而死亡。PAH预后较差，且缺乏有效的治疗手段。其病因涉及环境与遗传因素，其发病机制尚未完全阐明。PAH时肺血管阻力进行性升高的原因是血管重构引起血管狭窄。肺血管重构的发生牵涉到多种因子（通路），如转化生长因子β、5-羟色胺、内皮素、一氧化氮（NO）、血小板衍生生长因子、成纤维细胞生长因子-2等。近期研究表明，miRNA在PAH肺血管重构发生过程中也发挥重要作用。文献报道，miR-130a不仅介导血管内皮细胞的增殖、迁移及血管形成，还参与心肌发育，更重要的是我们前期研究证明，miR-130a通过抑制Gax（Growth arrest-specific homeobox）可促进主动脉平滑肌增殖，其在高血压重构血管中表达升高。然而，miR-130a在肺动脉高压形成中的作用及机制尚不清楚。.结果发现，低氧及MCT诱导的PAH大鼠右心室压及肺动脉压较正常对照组明显升高；肺动脉显著增厚。PAH肺动脉组织中miR-130a和Gax的表达均上调，pri-miR-130a的表达不变。免疫组化显示Gax主要表达在肺血管。低氧处理PASMCs可引起细胞增殖，同时miR-130a表达呈时间依赖性升高，pri-miR-130a的表达不变。使用miR-130a 抑制剂可以取消低氧引起的促增殖作用。过表达miR-130a可直接促进PASMCs增殖，同时对平滑肌细胞表型标志物-SMA的表达没有影响。miR-130a 的靶基因Ddx6 在PAH肺动脉组织中表达降低。PASMCs中过表达miR-130a可以抑制Ddx6的表达。抑制Ddx6可促进PASMCs增殖。 预测BMPR2、SMAD5和ACVR1（Activin A receptor, type I）是miR-130a的靶点。构建了这三个靶基因-萤光素酶报告基因质粒，但是miR-130a对含有预测靶基因的萤光素酶的活性没有影响。.结果提示，miR-130a具有促PASMCs增殖作用，并介导PAH肺血管重构形成，其机制是通过抑制Ddx6表达。Ddx6具有抑制PASMCs增殖作用，Ddx6下调可引起PASMCs增殖。PAH时miR-130a的升高发生在转录后水平，低氧可促进miR-130a合成加速，进而促进细胞增殖。