复元醒脑汤调控糖尿病脑梗死血管重建中Rab1介导的AT1R囊泡运输的分子机制

Based on the function of Rab1 GTPase mediated vesicular transport of Angiotensin II type 1 Receptor (AT1R) in revascularization and the evidences provided by our previous research works, this project intends to observe the expression of Rab1 GTPase and the intracellular transport of AT1R in microvascula endothecial cells of cerebral cortex and ischemic brain tissue of the rats with diabetic cerebral infarction. The experiments will be carried by saturated ligand assay, detection of laser confocal microscope, cells transfected with lentiviral packaging Rab1WT, technology of small interfering RNA and western blot in vitio and in vivo.The results will find out some pathogenesis of diabetic cerebral infarction and reveal the molecular mechanisms of Fuyuan Xingnao Decoction on revascularization in the process of treating the disease, which will provide a new idea and an effective therapeutic target for clinical treatment for diabetic vascular complications including diabetic cerebral infarction.

基于Rab1蛋白介导的AT1R囊泡运输在血管重构中的作用以及项目组前期研究工作基础，本项目拟通过体内、体外实验，应用饱和配体测定法、激光共聚焦显微镜检测技术、细胞转染慢病毒包装的Rab1WT、Rab1小干扰RNA基因沉默技术、蛋白印迹等实验技术与方法，拟在缺血状态下，开展复元醒脑汤干预脑皮质微血管内皮细胞和糖尿病脑梗死大鼠缺血脑组织Rab1的表达及其介导的AT1R在囊泡运输中变化的对比研究，探讨糖尿病脑梗死发生的病理机制与复元醒脑汤促进血管重构的分子机制，为临床研究防治糖尿病脑梗死等糖尿病血管并发症提供一条全新思路和有效作用靶点。

糖尿病并发的脑梗死是最常见、最严重的血管并发症，研究发现，糖尿病脑梗死缺血损伤区血运重建，对缺血区神经功能修复具有重要作用。我们前期承担的国家自然科学基金（No.81072790、81273725）研究结果，从不同机制证实了缺血区域的血管新生对糖尿病脑梗死预后产生显著效应。复元醒脑汤以复元醒脑为根本治法，根据我院已故全国名老中医胡建华教授的学术经验，并结合课题组的长期临床实践所提出，本研究从其促血管新生入手，通过体内、体外实验，应用饱和配体测定法、 透射电镜检测技术、 细胞转染慢病毒包装的 Rab1WT、 Rab1小干扰 RNA（siRNA）基因沉默技术、蛋白印迹等实验技术与方法，将复元醒脑汤设为实验组，阳性药物尼莫地平片联合二甲双胍设为对照，结果表明复元醒脑汤能够降低血糖，促进血管生成，改善脑微血管超微结构，从而减少糖尿病性脑梗塞梗死面积，缓解糖尿病性脑梗死，改善大鼠神经功能缺损行为。复元醒脑汤参与血管重建的通路是Rab1介导AT1R转运到细胞膜上的囊泡运输，与AngII结合后增加下游VEGF的表达，从而加速血管新生，且其调节作用大于阳性药组。这可能是糖尿病脑梗死发生的病理机制和复元醒脑汤促进血管重构的机制之一，为研究如何防治糖尿病脑梗死等糖尿病血管并发症找到了新的靶点、提供了新的依据，开辟了新的科研思路和方法。