大豆花叶病毒新蛋白P3-PiPo的大豆互作因子鉴定及功能研究

大豆花叶病毒（SMV）是世界大豆产区最普遍的病害之一,严重影响产量和品质。而P3-PiPo是新近发现的SMV重要编码蛋白，已证实它在病毒的细胞间运动中起着决定性的作用，在前人研究最新成果的基础上，本项目拟采用膜系统酵母双杂交技术从混合大豆cDNA文库上筛选与SMV P3-PiPo蛋白互作的寄主蛋白，分离鉴定靶蛋白；用pull-down试验和双分子荧光互补技术(BiFC)分别证明P3-PiPo蛋白与靶蛋白的体外和体内互作；然后利用生物信息学手段和分子技术分析互作因子：预测基因属性，互作的关键氨基酸位点，亚细胞定位情况，表达量差异分析；最后将筛选得到的靶蛋白通过病毒诱导的基因沉默（VIGS）方法检测目的蛋白能否影响大豆花叶病毒（SMV）的侵染过程。本项目的研究成果将阐明互作因子在SMV侵染过程中生物学功能及作用机理，为揭示病毒致病的分子机制、制定新的抗病毒策略提供理论支撑，应用前景非常广阔。

大豆花叶病毒（SMV）每年造成大豆严重的产量损失。P3-PiPo是SMV编码蛋白，已证实它与CI共同调节胞间连丝处锥形结构的形成，完成病毒的细胞内运动。本项目围绕SMV P3-PiPo蛋白与寄主的互作关系开展研究，试图揭示互作因子在SMV侵染过程中生物学功能及作用机理。结果如下：（1）采用膜系统酵母双杂交技术从混合大豆cDNA文库上筛选与SMV P3-PiPo蛋白互作的寄主蛋白59个，用酵母双杂和双分子荧光互补 (BiFC)进一步证明P3-PiPo蛋白与靶蛋白互作；（2）对寄主基因进行了功能注释、表达量分析和亚细胞定位；（3）得到了eIF4E 基因对SMV产生抗性的可能位点；（4）得到了SMV编码蛋白的互做图谱；（5）选择5个基因进行功能验证，将筛选得到的靶蛋白通过病毒诱导的基因沉默（VIGS）方法检测目的蛋白能否影响大豆花叶病毒（SMV）的侵染过程。