拟环纹豹蛛Pardosa pseudoannulata卵黄蛋白及卵黄发生与调控机理的研究

蜘蛛是农田中一类重要的捕食性天敌，能有效控制飞虱、叶蝉等农业害虫，但目前对蜘蛛生殖生理的研究甚少，从而影响其种群生殖力和田间数量。项目拟以农田优势种蜘蛛拟环纹豹蛛Pardosa pseudoannulata为研究对象，运用SDS-PAGE、间接竞争酶联免疫吸附反应(ELISA)、分子筛与离子交换层析、组织培养、生物化学等多学科交叉的研究方法，对拟环纹豹蛛的卵黄蛋白进行分离纯化，分析其理化性质，制备卵黄蛋白的单克隆抗体，查明胚胎发育和胚后发育阶段卵黄（原）蛋白的代谢规律及去向，明确卵黄蛋白的合成场所，确定保幼激素和蜕皮激素是否对蜘蛛的卵黄发生具有调控作用以及如何调控。研究结果有助于阐明蜘蛛卵黄发生的调控机制，揭示蜘蛛的生殖生物学规律，对于提高蜘蛛繁殖力及其种群数量、开展蜘蛛的人工饲养以及有效保护利用蜘蛛均具有重要的理论和实践价值。

项目以拟环纹豹蛛为研究材料，通过凝胶过滤层析对其卵黄蛋白进行了分离纯化，获得了适合拟环纹豹蛛卵黄蛋白提取的一套方法体系；利用蛋白质电泳、糖脂染色等方法测定了拟环纹豹蛛卵黄蛋白的等电点、氨基酸组成及分子量大小等一系列理化性质，结果表明拟环纹豹蛛卵黄蛋白为生殖期雌蛛所特有，等电点为pH6.5-7.4，卵黄蛋白经苏丹黑B和希夫试剂染色呈阳性，说明该卵黄蛋白是一种糖脂蛋白，其分子量与昆虫卵黄蛋白的分子量较接近；测定了拟环纹豹蛛胚胎发育和胚后发育中卵黄蛋白的多肽组成，分析了胚胎发育和胚后发育过程中卵黄蛋白的降解动态，表明在胚胎发育过程中, 卵黄蛋白含量下降明显，在刚孵化的幼蛛中已检测不到卵黄蛋白的存在，其主要为发育中的胚胎提供营养物质。刚孵出的雌幼蛛体内血淋巴、脂肪体和卵巢中卵黄蛋白浓度上升很快，保持一段时间后逐渐降低；通过免疫家兔，并将所得抗血清经雄蛛匀浆液吸收，初步获得了拟环纹豹蛛卵黄蛋白的单克隆抗体；研究了激素对卵黄原蛋白和卵黄发生的调控，证明保幼激素和蜕皮激素对拟环纹豹蛛的卵发育均有促进作用，共同参与调控拟环纹豹蛛的生殖，影响其卵黄的发生。对卵巢发育的研究表明，拟环纹豹蛛的性腺指数小，性未成熟时，随体重增加而增加，性成熟后，不再随体重增加而增加，仅随卵细胞的周期变化。项目研究结果对于深入阐明蜘蛛卵黄发生及其调控机理，揭示蜘蛛生殖生物学规律具有重要的科学意义。