激素性股骨头缺血性坏死血清蛋白标志物的建立及中药防治机理研究

Avascular necrosis of femoral head (ONFH) is one of problem in the medical field which has yet been overcome, however, its pathogenesis is unknown. Pathological study of ONFH is particularly urgent, the exact pathogenesis will lay the foundation to find the best treatment options. (1) In this study, the methods of proteomics will be used to study the difference of serum proteome expression between steroid-induced avascular necrosis of femoral head (SONFH) patients and normal human to find the pathogenesis of SONFH; (2) to find serum protein markers of SONFH used for early diagnosis and early treatment; (3) to study the correlation of pathological stage of SONFH and serum protein markers, to predict prognosis of SONFH from the molecular level and efficacy of hip-preserving surgery; (4) to lay a foundation of preventing SONFH by Screening of high-risk patients using hormone and taking early intervention measures. (5) to study differences of protein express of bone marrow mesenchymal stem cell induced by hormone before and after intervention in vitro, and differences of serum protein express of patients with SONFH before and after treated with Chinese Medicine （Yuan Shi Shengmai Cheng Gu piece) ;in order to find the mechanism of Chinese Medicine (Yuan Shi Shengmai Cheng Gu piece) used to treating SONFH, and to lay a foundation for the further development of new drugs and improve efficacy.

股骨头坏死（ONFH）是医学领域目前尚未攻克的难题之一，然而其发病机制不详。对于股骨头缺血坏死的病理学研究尤为迫切，确切的发病机理将为寻找最理想的治疗方案奠定基础。(1)本研究采用蛋白质组学方法，研究激素性股骨头坏死（SONFH）患者与正常人群血清蛋白质组表达差异，阐述SONFH的发病机制；（2）发现SONFH早期诊断血清蛋白标志物，早期诊断，早期治疗；（3）研究股骨头坏死病理阶段与血清蛋白标志物的相关性，从分子水平判断股骨头坏死预后及保髋手术治疗疗效；（4）为使用激素的高危患者进行筛查，采取早期干预的措施，预防股骨头缺血坏死奠定基础。（5）研究中药（袁氏生脉成骨片）对体外培养激素诱导骨髓间充质干细胞蛋白质差异及SONFH患者中药（袁氏生脉成骨片）治疗前后血清蛋白质标志物差异，阐述中药（袁氏生脉成骨片）治疗股骨头坏死作用机理，为进一步新药开发，提高疗效奠定基础。

股骨头缺血性坏死（ONFH）的发病机制不详，尽管存在多种学说，但任何一种学说均不能完全解释股骨头缺血性坏死的确切发病机制。本研究采用蛋白质组学方法，研究激素性股骨头坏死（SONFH）患者与正常人群血清蛋白质组表达差异，阐述 SONFH 的发病机制；从中筛选 SONFH 早期诊断血清蛋白标志物，早期诊断，早期治疗；研究中药（袁氏生脉成骨片）对体外培养激素诱导骨髓间充质干细胞蛋白质差异及 SONFH 患者中药（袁氏生脉成骨片） 治疗前后血清蛋白质标志物差异，阐述中药（袁氏生脉成骨片）治疗股骨头坏死作用机理。. 通过双向电泳及质谱分析发现：与脂质代谢相关的锌α2糖蛋白（Zinc-ALpha2-Glycoprotein，ZAG）、载脂蛋白E(Apolipoprotein E，apoE)和载脂蛋白AI表达下调，与局部缺血缺氧相关的血清谷胱甘肽过氧化物酶(Plusma glutathione peroxidases，GPX-3)表达上调，提示激素性股骨头缺血性坏死存在脂质代谢异常及局部缺血缺氧两种机制。. 再次通过BMSCs体外培养发现，与脂质代谢异常相关的脂肪酸合成酶（FASN）表达下调，但袁氏生脉成骨片对FASN的表达无显著影响；然而袁氏生脉成骨片含药血清干预BMSCs后，HSP，COP9和VCP表达水平的显著升高，提示其作用机理可能在于提高BMSCs的应激性和自我的保护作用，抑制细胞凋亡，同时可能通过MAPK途径影响BMSCs的成骨分化从而加速修复骨坏死。. 激素性股骨头坏死组、激素性股骨头坏死中药治疗组和健康组均使用iTRAQ（同位素标记相对和绝对定量）技术进行扫描，共检测蛋白399个。差异表达蛋白的途径富集分析，在激素组vs健康组和中药组vs健康组中均可见到预测的生物标志物LPE参与阿尔茨海默病的富集途径。在中药组vs健康组中，LPA参与PPAR信号通路的富集途径;纤维连接蛋白参与癌症，小细胞肺癌和上皮细胞的细菌侵入的途径的富集途径。在中药组vs健康组和中药组vs激素组中均可见到纤维蛋白原α，β和γ参与血小板活化的富集途径。在中药组vs激素组中，纤维连接蛋白参与肌动蛋白细胞骨架的调节的富集途径。