H5N1亚型禽流感病毒感染与非感染状态下鸡和鸭免疫球蛋白可变区遗传多样性研究

禽流感是由正粘病毒科流感病毒属A型流感病毒引起的禽类传染性疾病，许多物种包括人类均可以感染。禽流感病毒具有高度变异性，致使依据单一或少数病毒分离株研制的疫苗常失去免疫保护作用，给该病毒防治带来困难。本研究以鸡和鸭免疫球蛋白可变区为研究对象，在了解H5N1亚型禽流感病毒感染状态下免疫球蛋白变异规律基础上，利用5'RACE技术，分别构建感染和非感染状态下鸡和鸭三种免疫球蛋白（IgM、IgY和IgA）重链和轻链V区基因表达文库，获得不同抗体重链和轻链V区基因表达谱，了解感染与非感染鸡和鸭不同抗体重链和轻链V区选择性重组和遗传多样性特征，探索鸡和鸭Ig V区基因的重组方式及在H5N1亚型禽流感病毒感染状态下特异性抗体表达规律。同时利用荧光定量PCR技术，研究两种类型IgY基因在鸡和鸭发病过程中的表达差异。本研究将为揭示禽类Ig选择性重组机制奠定基础，为H5N1亚型禽流感病毒防治和抗病育种提供依据。

禽流感是由禽流感病毒(AIV)所引起的一种流行性高致病性传染病，许多物种包括人类亦可感染。禽流感病毒具有高度变异性，致使依据单一或少数病毒分离株研制的疫苗常失去免疫保护作用，给该病毒防治带来困难。由于不同宿主对该病毒具有不同的易感性。本研究对SPF鸡和鸭进行人工感染禽流感病毒，在了解H5N1亚型禽流感病毒感染状态下免疫球蛋白变异规律的基础上，以鸡和鸭免疫球蛋白可变区（V区）为研究对象，利用5’RACE技术，分别构建了感染和非感染状态下鸡和鸭三种免疫球蛋白（IgM、IgY和IgA）重链和轻链V区基因表达文库，获得了不同抗体重链和轻链V区基因表达谱，阐明了感染与非感染鸡和鸭不同抗体重链和轻链V区选择性重组和遗传多样性特征，揭示了鸡和鸭Ig V区基因的重组方式及在H5N1亚型禽流感病毒感染状态下特异性抗体表达规律。同时利用荧光定量PCR技术，阐明了两种类型IgY基因在鸡和鸭发病过程中的差异性表达趋势。同时研究表明，SPF鸭感染H5N1亚型禽流感病毒后的第7天，可以检测到鸭体内病毒的表达，并在第15天达到最大值；鸡和鸭的IgA、 IgM、IgY以及鸭的IgY(△Fc)在感染AIV的组织中的mRNA表达量均高于在SPF组织中的表达量，尤其在脾，法氏囊，胸腺等免疫组织中差异显著。而鸭的两种IgY比较发现，截短型的IgY(△Fc)表达量显著低于完整型的IgY。5’RACE获得长度为500-750bp的不同免疫球蛋白V区序列，对每种免球蛋白的感染和非感染各100条序列进行生物信息学分析，感染和非感染状态下IgV存在不同的序列特征，从已经得出的鸡的轻链的对比结果中看出，感染和非感染的鸡的IgL各100个序列的1-98位氨基酸序列存在不同的趋势，感染后的氨基酸序列前两位缺失L和V;在第28位上缺失一个Y。并在第43位上以V替代了L，推测是感染H5N1病毒后，产生的特异的抗体谱。本研究初步揭示了禽类Ig选择性重组的机制，从宿主的角度出发，获得H5N1亚型禽流感病毒特异表达的免疫球蛋白V区序列， 为该病的防治开辟新的途径，同时为抗病育种提供依据。