VASN蛋白作为血清AFP阴性肝细胞癌标志物及预后分子的研究与机制探讨

中国是原发性肝细胞癌（HCC）的高发国家，其中约有1/3肝癌患者血清AFP阴性，这部分肝癌患者缺乏有效的肿瘤标志物用于预后判断与疗效评价。我们通过新近建立的液相差异SELEX技术方法，从伴肝外转移的AFP阴性HCC患者血清中鉴定出一个与正常血清成分差异的蛋白- - VASN蛋白。该蛋白与肿瘤的关系还未有报道。研究认为，VASN通过与TGF-β结合阻断TGF-β信号通路，参与新生血管形成。其相似蛋白SLIT蛋白在多种实体瘤中高表达，与肿瘤的恶性程度相关。基于我们的工作基础和国内外研究进展，我们推测患者血清中的VASN蛋白与患者的预后相关。VASN蛋白可能通过TGF-β信号通路及与SLIT相似的受体机制参与肿瘤细胞增殖、抗凋亡及诱导新生血管形成。本立项将利用分子生物学手段验证以上推测，明确VASN蛋白作为新的AFP阴性HCC血清标志物和预后分子的临床意义，初步阐明其作用机制。

临床上约有30%～40％肝癌患者血清甲胎蛋白阴性，且近年来又有增多的趋势。这部分肝癌患者缺乏有效的肿瘤标志物用于辅助诊断、预后判断与疗效评价。.利用液相SELEX技术，我们实验室从伴肝外转移的血清AFP阴性肝细胞肝癌患者血清中鉴定出一个候选标志物分子——VASN蛋白。首先，收集了100例肝癌血清与101例正常血清，定量检测血清VASN含量，发现肝癌血清中VASN含量高于正常血清，与AFP无明显相关性，和AFP联合应用可以提高辅助诊断的敏感性。进一步证实肝癌细胞株及肝癌组织中的VASN mRNA水平与蛋白水平均高于正常对照。免疫荧光证实VASN位于细胞表面和组织间隙，提示血清中的高水平VASN可能是由肝癌细胞分泌表达的。MicroRNA145是导致VASN高表达的一个重要机制：VASN是miR145的靶标，在肝癌细胞中miR145表达下调，其靶标VASN因此高表达。.肝癌细胞中沉默VASN表达和正常肝细胞株过表达VASN的实验均提示，VASN对肝癌细胞的增殖、迁移、上皮-间质转化有促进作用，并抑制细胞凋亡，因此，作为膜蛋白和/或游离蛋白，VASN可能成为肝癌生物治疗的有效靶标。