蓝莓中可萃取与不可萃取多酚对巨噬细胞抗炎作用及差异性机理研究

多酚作为一种天然抗氧化剂逐渐引起人们的重视，研究证明果蔬中不可萃取多酚的含量要远高于可萃取多酚，这些不可萃取多酚同可萃取多酚一样具有各种生物活性，是人类食物中具有保健特性的重要组分。本项目以多酚含量较高的蓝莓为实验材料，分离纯化可萃取与不可萃取多酚，研究两种多酚在RAW264.7巨噬细胞抗炎过程中的机理及差异性。从细胞炎症因子的分泌，mRNA基因表达水平，与细胞培养时间和添加浓度之间的相关性，在干预炎症过程中是否通过NF-κB信号传导途径，对iNOS及产物NO，COX-2及其产物PGs的影响等多个方面探讨可萃取和不可萃取多酚在抗炎过程中的作用机理及其差异。通过这些研究旨在引起人们对不可萃取多酚等活性成分的重视，打破目前的研究思维束缚。

多酚作为一种天然抗氧化剂逐渐引起人们的重视，研究证明蓝莓具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎等功效，这些都是由高含量的多酚所介导的。根据多酚的结合方式可分为可萃取多酚（EPP）和不可萃取多酚（NEPP）。本文从蓝莓中分离纯化EPP和NEPP，并对组成成分进行了比较分析，以RAW264.7巨噬细胞为模型，研究了两种多酚对巨噬细胞因子、炎性酶及NF-κB核因子表达的影响。.以蓝莓为原料，通过单因素实验及响应面分析确立的EPP最佳工艺为提取次数2次、超声频率400W、乙醇浓度55%、料液比1:25、超声时间1.5h，萃取率可达到11.05 mg/g。去除EPP后剩余的残渣，采用酸水解的方法分离NEPP，通过单因素实验及响应面分析确立的EPP最佳工艺为温度74℃、时间22.5h、料液比1:21，NEPP的萃取率为27.25mg/g。通过高效液相色谱测定了两种多酚的主要组成，EPP和NEPP都主要是飞燕草色素类、牵牛花色素类、矢车菊色素类、芍药花色素、锦葵色素类和乙酰化的花色苷。.用LPS诱导细胞RAW264.7生成炎症模型。结果表明EPP和NEPP明显抑制IL-1β的分泌，促进IL-6、IL-10、IL-12、TNF-α的分泌。进一步通过实时定量PCR测定EPP和NEPP对以上各因子基因表达的影响，EPP和NEPP明显抑制IL-1β、IL-6mRNA的表达，促进IL-10、IL-12 mRNA的表达，但对TNF-α的基因表达影响不明显。总体培养时间在12-48h的作用效果较好。.蓝莓EPP和NEPP均能抑制RAW264.7细胞中NO、iNOS及COX-2的分泌量及iNOS和COX-2基因表达，且随着添加浓度的增加，抑制效果越明显。在12-48h培养时间内两种多酚的抑制效果较好。在相同浓度下，NEPP的抑制效果要优于EPP。不同添加浓度EPP和NEPP处理组中NF-κB p65表达明显，条带清晰，然而磷酸化的p65被多酚明显抑制。不同培养时间内p65表达明显，而P-p65的表达也被明显抑制。表明蓝莓中的NEPP同EPP一样，在巨噬细胞中的抗炎是经由NF-κB信号通路发挥作用的。.通过上述研究，初步探讨蓝莓中可萃取和不可萃取多酚在抗炎过程中的作用机理及其差异。这在引起人们对不可萃取多酚等活性成分的重视，打破目前的研究思维束缚，为从事活性物质的研究工作者提供了一定的思路。