slit2基因抑制CNV及其作用机制相关信号通路的研究

脉络膜新生血管（CNV）是多种眼底疾病的最终结局，常引起严重的视力障碍。CNV发生发展过程中局部组织新生血管生长因子和抑制因子动态失衡是主要因素，此过程主要由视网膜色素上皮细胞（RPE）和脉络膜血管内皮细胞（CEC）参与。slit2抑制肿瘤新生血管的作用受到最新研究的关注，推测此机制同样存在于CNV中，本项目通过超声微泡介导slit2基因和slit2siRNA转染CNV模型大鼠，用基因的高表达和沉默两种方法，研究其在在治疗CNV中的作用。用缺氧培养RPE和共培养RPE与CEC的方法，进行slit2在RPE细胞中对血管内皮生长因子（VEGF）和色素上皮衍生因子（PEDF）影响及其信号转导机制的研究，以及slit2可能通过SRC/Rac1和SRC/Cdc42信号通路抑制CEC活动的研究，阐明了slit2抑制CNV的可能分子机制，找到slit2与CNV的关系，为CNV的治疗提供一种新的思路。

脉络膜新生血管类疾病是目前致盲的主要因素之一，CNV的形成与治疗仍是目前研究的热点与难点，本课题致力于研究CNV形成的部分信号通路。研究内容主要包括：体外实验通过腺病毒介导Slit2转染视网膜色素上皮细胞（retinal pigment epithelium ，RPE），并共培养RPE细胞和脉络膜血管内皮细胞（Choroidal endothelial cells，CEC），旨在研究Slit2对RPE细胞产生血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）的影响及其作用机制，以及对CEC细胞增殖、移行和管腔形成的影响；体内实验通过超声微泡介Slit2转染CNV大鼠模型，旨在为治疗CNV寻找一条新的治疗方向。研究结果发现Slit2及其受体Robo1在RPE细胞上存在表达；当RPE细胞处于缺氧状态下，细胞中Slit2、Robo1、VEGF的表达有明显增加，当Slit2的表达受到抑制时，可见VEGF的表达也同时下降；在常氧状态下的RPE细胞中，Slit2能促进VEGF的表达，以及增加AKT、ERK的磷酸化表达增加，当加入PI3K/AKT或MEK/AKT的特异性信号通路阻断剂LY294002或PD98059时，能检测到VEGF的表达降低，表明Slit2能通过PI3K/AKT及MEK/AKT信号通路促进VEGF的表达；在共培养体系下Slit2能促进血管内皮细胞的增殖、迁移及管腔形成；以上结果表明，Slit2能调控RPE细胞中VEGF的表达增加，这种调控作用有PI3K/AKT以及MEK/ERK这两条信号通路的参与，并且Slit2能促进促进血管内皮细胞的增殖、移行及管腔形成，暗示着Slit2可能参与了脉络膜新生血管的形成。这一实验结果验证了Slit2参与CNV形成的信号通路并为CNV的治疗提供了新的理论依据。