miR-34a负调控CD44阳性肺癌干细胞靶点对非小细胞肺癌的抑制作用与机制

癌干细胞（CSC）是肺癌复发转移的祸根。我们前期研究发现抑制肺CSC靶点具有抗非小细胞肺癌（NSCLC）作用；Tang等发现miR-34a 抑制CD44+PcaCSC的抑癌作用CD44新靶点。我们与Tang一起，拟首先实时定量PCR检测不同类型人NSCLC细胞株及实体瘤中分选的CD44+CSC与对照组中miR-34a表达；再用miRNA转染技术体外调控肺CD44+CSC的miR-34a表达，检测实验与对照组细胞增值、侵袭、克隆与肿瘤球形成能力，基因芯片检测其相关基因表达谱变化，Western Blot等检测其相关靶蛋白表达水平；最后，在肺CD44+CSC移植NOD/SCID鼠模型研究miR-34a的抑瘤与抗转移作用以及相关调控基因的表达。以期阐明miR-34a针对CSC抑制NSCLC与抗转移作用及其机制，为探索miR-34a针对CSC为靶标的抗癌治疗新策略提供有价值的科学基础和实验资料。

人肺癌是高转移、复发和病死率的恶性肿瘤。而癌干细胞（cancer stem cells，CSCs）是癌发生、复发和转移的祸根。肺癌难治可能与之存在肺CSCs（lung CSCs，LCSCs）的机制有关。本研究中，根据非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）中LCSCs高表达CD44分子和低/失表达肿瘤抑制性微小 RNA miR-34a，我们研究了miR-34a调抑LCSCs对NSCLC的抑制作用。①我们先用流式细胞等技术对NSCLC细胞系A549、H460和H1299中CD44等干样标志物进行了分析，显示A549、H460和H1299细胞系中的CD44阳性细胞率分别为97.2%、99.3%和99.2%（再进一步流式分选为CD44hi和CD44low用于后续实验）；②以合成的miR-34a oligos脂质体转染体外培养的NSCLC细胞系A549、H460和H1299，并设anti-miR-NC oligos (anti-NC) 对照。结果显示：miR-34a分别抑制各细胞系细胞holoclone形成和克隆性扩增，对A549、H460和H1299的克隆生长抑制率分别为90.8%、84.2%和77.8%；③我们用上述三个细胞系分别验证miR-34a oligos对NOD/SCID成瘤的影响，显示出抑瘤作用趋势,其中H1299处理组的肿瘤启动频率(TIF)比对照组显著降低(TIF)；④进而，我们从H460细胞系中分选纯化出CD44hi和CD44low的LCSCs，用慢病毒载体介导miR-34a转染，并以anti-miR-34a (anti-34a)做拮抗对照。实验结果显示，miR-34a可显著抑制肺癌发生，抑瘤率为46.9%，而anti-34a将促进肿瘤发生和进展。我们的初步实验结果表明，miR-34a是LCSCs的负性调控分子，对CD44hi LCSCs和NSCLC具有抑制作用，其作用机制可能是miR-34a直接与LCSCs的CD44靶点结合，通过调抑CD44分子抑制CD44+LCSCs来实现抑制NSCLC。本研究的初步结果将为进一步研发miR-34a针对CSCs机制治疗NSCLC提供了初步资料。今后有待更加深入的作用机理和新靶点调控机制研究。