烟雾暴露哮喘大鼠的糖皮质激素敏感性及其机制研究

Asthma is a chronic airway inflammatory disease. Smoking could cause pathogenetic condition be aggravated in asthma patients. And smoking asthma patients are insensitive to glucocorticoid treatment. We wonder whether it is induced by the decrease of glucocorticoid receptor sensitivity. Some studies indicate that p38 MAPK takes part in the localization and transfer of mast cells and eosinophils, the release of mediators of inflammation and the process of development, differentiation, maturation and activation of lymphocytes.The activation of p38 MAPK in asthmatic rats' lungs is augmented. SB203580, an inhibitor of p38 MAPK, inhibites the kinase activity of p38 MAPK, thus inhibites the inflammatory reaction of airway in asthmatic rats.But does the sensitivity of glucocorticoid receptor in asthmatic rats exposed to cigarette smoke decrease? What's the mechanism of glucocorticoid resistance in asthmatic rats exposed to cigarette smoke? Could SB203580 inverse the glucocorticoid resistance of asthmatic rats exposed to cigarette smoke? Does SB203580 work by regulating the expression of GR、HSP90 or HDAC ? All of the problems would be solved in our study, and we would devote ourselves to the treatment of refractory asthma.

哮喘是慢性气道炎症性疾病，吸烟的哮喘患者症状加重且对糖皮质激素治疗不敏感，但这是否由于糖皮质激素受体敏感性下降导致？目前尚不清楚。研究表明p38 MAPK参与了肥大细胞、嗜酸性粒细胞的定位迁移以及炎症介质的释放和淋巴细胞的发育、分化、成熟和活化的全过程，且哮喘大鼠肺组织p38 MAPK活化增强。以SB203580为代表的p38 MAPK抑制剂能作用于ATP 结合活性位点，使p38 MAPK失去与ATP结合的能力而失去激酶活性，抑制p38 MAPK的活性可抑制哮喘大鼠气道炎症反应。但烟雾暴露的哮喘大鼠是否存在糖皮质激素受体敏感性的下降？其机制是什么？SB203580能否逆转其糖皮质激素受体不敏感性？其是否通过调节GR、HSP90及HDAC的表达而发挥作用？这都是本研究将解决的问题。本研究将为难治性哮喘的治疗进行有意义的探索。

哮喘是慢性气道炎症性疾病，吸烟的哮喘患者症状加重且对糖皮质激素治疗不敏感，但这是否由于糖皮质激素受体敏感性下降导致？ 目前尚不清楚。 研究表明 p38 MAPK 参与了肥大细胞、嗜酸性粒细胞的定位迁移以及炎症介质的释放和淋巴细胞的发育、分化、成熟和活化的全过程，且哮喘大鼠肺组织p38 MAPK 活化增强。以 SB203580 为代表的 p38 MAPK 抑制剂能作用于 ATP 结合活性位点，使 p38 MAPK 失去与 ATP 结合的能力而失去激酶活性，抑制 p38 MAPK的活性可抑制哮喘大鼠气道炎症反应。但烟雾暴露的哮喘大鼠是否存在糖皮质激素受体敏感性的下降？其机制是什么？ SB203580 能否逆转其糖皮质激素受体不敏感性？其是否通过调节 GR、 HSP90 及 HDAC 的表达而发挥作用？这都是本研究将解决的问题。本研究将为难治性哮喘的治疗进行有意义的探索。结果如下：我们已经成功建立了烟雾暴露的支气管哮喘大鼠模型，观察p38有丝分裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK）抑制剂SB203580对其的治疗作用，发现SB203580可以改善烟雾暴露的哮喘大鼠的气道炎症，减轻其支气管收缩反应。随后，通过荧光定量PCR检测大鼠肺组织糖皮质激素受体（GR）、热休克蛋白90（HSP90）和p38 MAPK mRNA的表达，经Western印迹检测大鼠肺组织GR、HSP90和p38 MAPK蛋白的表达。培养人肺腺癌A549细胞进行相应的体外实验。.结果发现，烟雾暴露哮喘组GR mRNA和蛋白表达较哮喘组显著下降，哮喘组HSP90 mRNA和蛋白表达明显高于其他3组，SB203580干预组HSP90 mRNA和蛋白表达明显低于烟雾暴露哮喘组，烟雾暴露哮喘组p38 MAPK mRNA和蛋白表达明显高于其他3组，差异均有统计学意义（P<0.05）。此外，我们还成功建立哮喘小鼠模型，通过烟雾暴露的方法造成激素敏感性下降，给予克拉霉素以及青蒿琥酯干预治疗，观察烟雾暴露哮喘小鼠气道炎症、激素敏感性相关指标的变化，结果提示克拉霉素能减轻烟雾暴露哮喘小鼠气道炎症，降低气道反应性，并能提高GRα的表达水平，改善烟雾暴露哮喘小鼠HDAC2活性和表达，降低PI3Kδ的表达和活性，从而改善烟雾暴露哮喘小鼠糖皮质激素反应性。青蒿琥