胞膜窖依赖的巨噬细胞再极化与溶瘤病毒的免疫协同作用及机制研究

So far, there is no target drugs available for three negative breast cancer (TNBC). Macrophages (MΦ) polarization anomalies can promote the epithelial mesenchymal transition (EMT), cancer cell invasion and migration promoted by EMT are the important causes of the metastasis and poor prognosis TNBC. We previously confirmed that oncolytic virus can be safely and effectively targeted tumor TNBC for destruction. Further, during the process of attacking cancer tissue by oncolytic virus，we use VCP inhibitor (a protein capable of trafficking CAV1 to lysosomes) to downregulate the degradation of CAV1. And, we found that the downregulated degradation of CAV1 can increase the infiltration and activation of MΦ in tumor. How does CAV1 play the role on MΦ? And, what is the role of CAV1 on TNBC? We put forward the hypothesis of "Through inhibition of TGF-βpathway, CAV1 promotes repolarization of MΦ, inhibition of EMT, reduce the tumor invasion and metastasis". We intend to use RNAi methods and the overexpression of wild type or dominant negative mutants to intervene CAV1/TGF-β pathway. After intervention, using quantitative PCR, confocal microscopy and flow cytometry techniques to study the changes related to MΦ. Using co-culture system to study the effect of MΦ on the EMT, migration and invasion of TNBC under the regulation of CAV1/TGF-β. Finally, using immunocompetent TNBC model to confirm the synergy effect of CAV1 and oncolytic virus for anticancer. This study will shed a light on the research for synergistic effect combining MΦ and oncolytic virus.

三阴乳腺癌(TNBC)，至今无靶向药物可用。巨噬细胞(Mφ)极化异常可促进上皮间质转化(EMT)，EMT促进的迁移、侵袭是TNBC易转移、预后差的重要原因。我们已确证溶瘤甲病毒能特异性靶向破坏TNBC。对VCP(它将窖蛋白1送往溶酶体降解)的抑制，可在Mφ提高窖蛋白1表达，在溶瘤病毒治疗的TNBC小鼠促进Mφ激活和小鼠存活。窖蛋白1对Mφ如何作用？与TNBC关系如何？我们提出“窖蛋白1可通过抑制TGF-β通路促进Mφ再极化，抑制EMT，免疫协同增效病毒溶瘤”的假说。我们拟采用过表达、显性阴性突变等手段干预窖蛋白1或TGF-β后利用PCR，ELISA、流式、共聚焦等研究Mφ的再极化，共培养法研究Mφ对单核细胞趋化以及TNBC迁移、侵袭、EMT的影响。最后，将利用TNBC皮下或原位移植瘤及转移癌模型小鼠确证窖蛋白1与溶瘤甲病毒的协同抗癌作用。本研究将为溶瘤病毒的Mφ相关免疫协同研究提供新思路。

溶瘤病毒疗法是一种新兴的使用可复制的溶瘤病毒用于抗癌的治疗方法。甲病毒能靶向性地在肿瘤组织复制并破坏肿瘤组织，激活抗肿瘤免疫。为了揭示的免疫激活机制，我们以人和小鼠肿瘤细胞（前列腺癌、三阴乳腺癌、结直肠癌）为对象，研究溶瘤病毒感染对于肿瘤微环境中巨噬细胞(Mφ)的影响。我们结合使用条件培养基和Transwell共培养细胞模型，研究了巨噬细胞（BMDM和Raw264.7等）、肿瘤细胞（R、HCT116、4T1）、病毒（alphavirus ）三者的相互作用。发现病毒可以感染巨噬细胞，感染后促进巨噬细胞发生型极化，型极化的巨噬细胞有利于病毒的清除，却促进极化向型偏移。进一步研究发现，TNBC细胞等肿瘤细胞来源的条件培养基也可以促进巨噬细胞型极化。然而，被感染肿瘤细胞来源的条件培养基却可以促进巨噬细胞型极化，有利于病毒的复制。利用PCR，ELISA、流式、共聚焦等技术研究其分子机制，发现VCP(缬酪肽蛋白)、窖蛋白1（CAV1）和HPGD等基因参与了巨噬细胞极化再极化的重编程。此外，我们还发现抗抗体可以介导巨噬细胞对肿瘤细胞产生抗体依赖的细胞吞噬作用（ADCP），进而通过促进病毒清除或促进胞葬作用，而发挥阻碍溶瘤病毒的作用。感染细胞的小鼠移植瘤模型研究小鼠对上述体外发现进行了确证。本研究将为溶瘤病毒的Mφ相关免疫协同研究提供新思路。