脂氧素对急性肺损伤肺泡上皮细胞钠通道的调控及机制研究

肺泡-毛细血管屏障损伤所致肺水肿是急性肺损伤的主要病理特征。新近证实肺水肿的清除是一个主动过程，肺泡上皮钠通道是肺水清除的始动力。我们前期工作发现促炎症消退介质脂氧素促进急性肺损伤肺水肿的清除，并证实脂氧素可上调肺泡Ⅱ型上皮钠通道的表达，这是脂氧素一个全新的生理功能。为此，本课题拟采用雾化吸入脂多糖建立大鼠肺损伤模型，应用Western 、激光共聚焦显微镜、单核素示踪技术、膜片钳、高效液相-质谱联用等技术，动态观察急性肺损伤肺泡上皮钠通道变化规律；了解脂氧素对肺泡上皮钠通道亚基mRNA及蛋白表达、活性及修饰的影响；研究脂氧素对肺泡上皮cAMP- PKA通路的影响；膜片钳技术了解脂氧素对肺泡Ⅱ型上皮钠通道电流影响；应用胸膜表面荧光技术研究脂氧素对钠离子和氯离子跨肺泡上皮转运过程的影响。通过本项目研究，进一步阐明脂氧素调控肺泡上皮钠通道具体机制，为急性肺损伤治疗提供新思路和实验依据。

肺泡-毛细血管屏障损伤所致肺水肿是急性肺损伤的主要病理特征。新近证实肺水肿的清除是一个主动过程，肺泡上皮钠通道是肺水清除的始动力。我们的前期工作发现促炎症消退介质脂氧素可促进内毒素性肺损伤肺泡水肿液的清除，使肺组织的干湿比值下降，在此基础上又证实了脂氧素可上调肺泡II型上皮细胞钠通道α亚基mRNA的表达，这是脂氧素一个全新的生理功能。为此，本课题拟采用静脉注射油酸或脂多糖建立大鼠肺损伤模型，应用实时定量 PCR、膜片钳、高效液相 - 质谱联用法、胶体金免疫电镜、western blot、膜片钳等技术，动态观察急性肺损伤肺泡上皮钠通道变化规律；了解脂氧素对肺泡上皮钠通道, Na,K-ATPase亚基mRNA及蛋白表达、活性及修饰的影响；研究脂氧素对肺泡上皮cAMP/cGMP通路的影响。通过本项目的研究发现，在油酸诱导的大鼠急性肺损伤和脂多糖攻击的大鼠原代肺泡Ⅱ型上皮细胞中，脂氧素A4上调ENaC，Na,K-ATPase 的蛋白表达和酶活性促进肺泡水肿液的清除，其机制可能是通过脂氧素受体(ALX)-cGMP介导的。此研究进一步阐明脂氧素促进肺泡水肿液清除的具体机制, 为急性肺损伤治疗提供新思路和实验依据。