新型Th9细胞及相关细胞因子在重症肌无力发病机制中的作用

重症肌无力（MG）是B细胞介导T细胞依赖的自身免疫性疾病的研究范例，该病中CD4+T细胞亚型之间的平衡变化决定该病的结局，在MG发病机制中有着极为重要作用。最新发现的CD4细胞新的亚型Th9，在免疫调节上有着强大功能，但Th9在MG中如何发挥作用从未有人证实，这为我们进一步探讨MG机制研究提出新的课题。我们在前期工作中已初步证实Th9参与EAMG的发病过程，并干预T细胞亚型格局及B细胞分泌功能，这为我们进一步证实并阐明Th9与MG的关系打下坚实基础。本课题以MG及其动物模型EAMG为研究对象，通过免疫学、分子、细胞生物学及病理学为手段证实：Th9在MG/EAMG发生、发展中的作用；阐明Th9对其他CD4细胞亚型分化的影响及具体途径；确定Th9对生发中心不同阶段B细胞的作用，探讨Th9影响B细胞经过STAT通路的具体机制。这些问题解决不仅丰富MG发病机制的内容，对临床靶点治疗MG意义重大。

经过3年的科研工作，我们如期的完成了课题内容。通过体内外实验证实Th9细胞参与了EAMG的发生和发展过程。在整个病程过程中，Th9细胞的表达显示出一种动态变化，即从发病早期起逐渐上升，到发病高峰期达到峰值。同时发现在EAMG的发生和发展过程中CD4+T细胞上高表达IL-9R，充分证实了IL-9在发挥其生物学效应时需与其配体相结合。体外封闭IL-9后，AChR特异性T细胞增殖减弱。另一方面，体内封闭IL-9进行预防性治疗，同时加入一组rrIL-9组进行对照，结果发现IL-9信号被阻断后EAMG的发病过程与未封闭IL-9组相比较，病程延后、临床评分降低；同时大鼠体内抗AChR抗体滴定度降低，说明体液免疫受到抑制。对神经肌肉接头NMJ处AChR免疫荧光检测发现IL-9封闭治疗组AChR的聚集量增多，平均荧光强度增强，从病理角度证实了封闭IL-9后对EAMG发生的预防作用。另外在体内实验中发现中和IL-9可以改变EAMG大鼠体内Th细胞亚型的分布，即促炎性细胞亚型Th1比例下降，而在机体内起到调节作用的Treg细胞亚型的比例升高，并且在基因水平同样验证了这一结果，T-bet和Foxp3的表达量和Th1细胞、Treg细胞的表达相平行。为了探讨这一过程的具体机制，我们对STAT通路进行了检测，结果发现淋巴细胞上p-STAT3/STAT3比例上升，解释了Th细胞亚型发生变化原因。并且我们在体外实验中中和IL-9得到了和体内相符的实验结果。体内外实验以及anti-IL-9和rrIL-9正反两个角度的数据综合分析总结出IL-9封闭后对EAMG的发生、发展起到了有效的预防作用。我们所取得的成果以科研论文的形式发表文章3篇，其中SCI收录3篇，SCI论文手稿1篇（现在修稿阶段），同时培养博士研究生2名，硕士研究生1名，圆满的完成了科研课题。