肝主疏泄功能对模型动物胆汁胆固醇、总胆汁酸浓度和BSEP、SRBⅠ基因表达的影响

胆固醇性胆结石是临床常见病和多发病。现在临床上有很多行之有效的中医方剂或者成药用于治疗胆石病，其理论基础是中医学认为胆汁是由肝之余气化生，胆汁的分泌和排泄与肝的疏泄功能密切相关。课题申请人前期研究也表明肝主疏泄功能的变化影响到胆汁胆固醇浓度。.课题拟对SD大鼠、昆明种小鼠和C57L小鼠采用居住入侵法、束缚法和CUMS法造模，并对小鼠采用普通饲料和致石饲料喂养，分别在肝疏泄太过和疏泄不及时取胆汁、脑组织、肝组织，检测胆汁中胆固醇（酶法）含量、总胆汁酸（酶循环法）含量，用荧光分光光度法检测脑组织5-HT、DA、NA含量，用PCR法定量分析肝组织中BSEP、SRBⅠ基因的表达，以进一步探讨肝不同疏泄状态对胆汁中胆固醇、总胆汁酸浓度以及BSEP和SRBⅠ基因表达的影响，进一步明确不同肝疏泄状态动物的行为学表现，并从分子生物学角度阐释中医藏象理论之肝主疏泄理论。

胆固醇性胆结石是临床常见病和多发病。临床很多行之有效的治疗胆石中医方剂或成药的理论基础是中医学认为胆汁由肝之余气化生，胆汁分泌和排泄与肝疏泄功能密切相关。“四时五脏”理论是中医学理论体系的重要组成部分，体现了中医固有的“天人相应”思维模式。该理论认为人体五脏的生理、病理变化与自然界四时变化有着密切关系。“肝应春”理论是“四时五脏”理论之一，认为：肝旺于春季，在春季肝的生发、疏泄之力增强。课题组通过对不同季节、不同造模方法制造的动物模型进行比较研究，分别研究了SD大鼠、昆明种小鼠和C57L小鼠在肝疏泄功能变化时的胆汁中胆固醇含量、总胆汁酸含量，脑组织中5-HT、DA、NA含量，肝组织中BSEP、SRBⅠ基因的表达。并在研究过程中自创鼠笼加报纸固定束缚法的造模方法，并通过研究表明这种方法与束缚应激模型、CUMS模型一样是相对稳定的情志疾病造模方式。结果表明：（1）中医肝应春的理论内涵与海马中单胺类神经递质之间存在相关性，束缚法、CUMS法模型组以及正常组春季5-HT、NE含量呈现出高于夏季，低于秋季，与冬季比较变化不明显的趋势，春季DA含量均显著高于其它三季。提示中医学“肝应春”理论存在着多种神经递质参与的复杂机制。（2）束缚应激模型、CUMS模型与正常组海马中单胺类神经递质的变化规律和春季与其它季节的变化规律相似。（3）春季正常组与春季CUMS组比较胆固醇含量差异具有统计学意义(P＜0.05)，春季CUMS组与夏季CUMS组比较其差异具有统计学意义(P＜0.05)。（4）CUMS组和单纯束缚组肝脏SRBⅠ基因mRNA的表达量和BSEP基因mRNA的表达量均较正常组肝脏基因的表达量增高，且SRBⅠ基因mRNA的表达量CUMS组与正常组、CUMS组与束缚组之间均存在着显著性差异（P＜0.05），但单纯束缚组与正常组之间没有显著性差异；而BSEP基因mRNA的表达量秋季CUMS组与秋季正常组之间差异显著（P＜0.01），且秋季各组的BSEP基因表达量均较春季组明显降低。以上研究表明：胆石病的从肝论治具有相当的科学依据，并且本研究成果多是纯粹的中医生理研究，中医学的“四时五脏”理论亦具有相当的科学内涵，值得进一步探讨。