CIT基因作为西妥昔协同作用靶标对结直肠癌发生发展的作用机制研究

Our previous study found that serine/threonine kinase 21 （CIT gene） showed high expression level in colorectal cancer tissues. CIT gene silencing can significantly inhibit colorectal cancer cell RKO proliferation. Both CIT and EGFR silencing can also significantly inhibit RKO cell proliferation. Those results suggest that CIT can be a potential drug target for colorectal cancer. CIT targeting may alleviate the cetuximab resistance and enhance the effect of treatment. This project uses RNA interference method by Lentivirus mediated, expands experimental samples range at both cell and animal levels, further validates CIT as a potential therapeutic target for colorectal cancer occurrence and development. By collecting relevant cases, this project validates relevance between cetuximab resistance and expression of CIT. This project also reveals the mechanism of interaction between CIT and EGFR. This project provides a new therapeutic target for the colorectal cancer treatment, and provides a theoretical basis for the combination of new target drug and EGFR.

本课题的前期研究发现，丝氨酸/苏氨酸激酶21（CIT基因）在结直肠癌肿瘤组织中呈现高表达，CIT基因沉默能够显著抑制结直肠癌细胞RKO的生长增殖；将CIT基因与EGFR基因共沉默时，能够显著增强对RKO的细胞增殖抑制。根据以上结果推测CIT基因能够作为结直肠癌肿瘤治疗的潜在靶标，与EGFR基因协同作用，显著抑制肿瘤发生发展，缓解EGFR单抗西妥昔耐药、增强药物治疗效果。本课题通过慢病毒介导的RNA干扰方法，在细胞水平和整体动物水平扩大实验样本，进一步验证CIT作为潜在治疗靶标对结直肠癌肿瘤发生发展的作用，以及CIT与EGFR靶标的协同作用；收集相关病例，验证CIT与西妥昔药物耐受的临床相关性，筛选下游应答分子揭示CIT和EGFR共同作用的分子机制。本课题将为临床治疗结直肠癌提供新的治疗靶点，并为该靶点药物与EGFR靶向药物联用提供理论基础。

近期越来越多的临床数据报道结直肠癌患者对西妥昔药物的耐受，为缓解西妥昔药物治疗所存在的原发性耐药和获得性耐药，并降低西妥昔药物使用浓度，找到能够与西妥昔协同作用治疗结直肠癌肿瘤的靶标尤为重要。通过前期的研究，可以推测CIT 基因能够作为结直肠癌肿瘤治疗的潜在靶标，与EGFR 基因协同作用，显著抑制肿瘤发生发展，缓解EGFR 单抗西妥昔耐药、增强药物治疗效果。.本课题（1）通过慢病毒介导的RNA 干扰方法，在细胞水平和整体动物水平扩大实验样本，采用PI/FACS技术、Western Blot、免疫组织化学染色法和异种移植等方法，结果发现CIT基因沉默能够显著抑制细胞增殖、菌落形成，明显减少瘤体大小及体积，同时能够使细胞周期停滞在G0/G1期、增加细胞凋亡，进一步验证CIT 作为潜在治疗靶标对结直肠癌肿瘤发生发展的作用，在临床样本中验证了CIT 基因与结直肠癌恶性程度的相关性。（2）我们干扰CIT基因后，进行了表达谱分析，发现有295个基因上调，590个基因下调，能够影响包括P53在内的10个显著的信号通路，验证了CIT可通过p53和细胞凋亡途径影响结直肠癌肿瘤的发生；探究了CIT抑制结直肠癌发生发展的分子机制。（3）收集相关病例，验证CIT 的临床相关性，进而发现CIT基因与结直肠癌病人的生存率有关，此外筛选下游应答分子揭示CIT 和EGFR 共同作用的分子机制，并进一步阐明了CIT 与EGFR 靶标协同能够显著抑制结直肠肿瘤的生长发展的作用，明确了在临床样本中CIT 基因表达之间的相关性。.本课题的研究成果帮助确认CIT基因对结直肠癌发生发展的作用以及临床相关性， 为临床治疗结直肠癌提供新的治疗靶点，且能够与EGFR基因协同作用，显著抑制结直肠癌肿瘤发生发展，缓解西妥昔耐药增强药物治疗效果。.项目取得的研究成果中，CIT作为结直肠癌发生发展的关键基因部分研究成果已经撰写在Up-regulation of CIT Promotes Growth of Colon Cancer Cells文章中，该文章目前于 Oncotarget期刊录用。另一部分CIT与西妥昔协同作用的结果，还有些下游机制工作未完成，完成后将会再撰写一篇SCI论文，争取在2017年发表。