CCNG2参与调控胶质瘤细胞对替莫唑胺敏感性的分子机制

We first confirm the expression of CCNG2 in human glioma tissues using real-time quantitative PCR, Western blot and immunohistochemical analysis. We provid data showing that the expression levels of CCNG2 in glioma decline as the degree of malignancy increased, and was negatively correlated with pathologic grade. Forced expression of CCNG2 in U251 cells inhibited cell proliferation, induced apoptosis ; suggesting that CCNG2 may be an important tumor suppressor gene . More importantly, we revealed that overexpression of CCNG2 confer the U251 more sensitivity to temozolomide. To reveal the underlying mechanism of increased sensitivity to temozolomide, cologenic survival assay, IC50 assay were performed. The downstream molecule regulated by CCNG2 will be confirmed by protein chip screening method. Through the above research,we aimed to demonstrate the molecular mechanism between CCNG2 abnormal expression and temozolomide chemotherapy resistance.

在前期基因芯片筛选的基础上，我们应用实时定量PCR、免疫印迹以及免疫组化的方法，首次在胶质瘤组织内验证了细胞周期素G2基因（CCNG2）的表达。结果显示，CCNG2表达水平随着胶质瘤恶性程度的增高而降低，并且与胶质瘤病理级别呈负相关。在U251细胞株内过表达CCNG2能够抑制胶质母细胞瘤的增殖、促进凋亡，提示CCNG2可能是一个重要的抑癌基因。更为重要的是，我们发现，CCNG2过表达能够促进U251细胞株对替莫唑胺化疗敏感性。为进一步探讨CCNG2过表达引起替莫唑胺化疗耐药敏感性增加的分子机制，本项目拟在多个胶质瘤细胞株过表达CCNG2，检测替莫唑胺化疗敏感性的改变；继而应用蛋白芯片筛选CCNG2下游直接调控的化疗耐药相关因子，并检验后者与CCNG2之间的联系通路，以阐明CCNG2过表达引起替莫唑胺化疗敏感性改变的分子机制。

目的：探讨CCNG2参与调控胶质瘤细胞对替莫唑胺敏感性的分子机制。.材料与方法：体外试验构建干扰及过表达CCNG2的胶质瘤细胞株模型，检测干扰或过表达CCNG2对胶质瘤细胞株增殖、凋亡及IC50的影响。筛选CCNG2表达影响替莫唑胺化疗敏感性的下游通路因子。根据体外试验结果进行裸鼠成瘤体内试验，探讨体内试验过表达CCNG2及联合应用替莫唑胺对裸鼠移植瘤的影响，探讨CCNG2过表达治疗胶质母细胞瘤的可能性。.结 果：本试验在U87细胞株、138细胞株中，成功构建CCNG2干扰或过表达模型。通过MTT试验、克隆形成试验、凋亡检测等试验表明，在U87、U138细胞株，过表达CCNG2能够抑制肿瘤细胞的生长和克隆形成，并能促进肿瘤细胞的凋亡。进一步检测U87、U138干扰和过表达CCNG2的细胞株IC50，发现过表达CCNG2细胞株能够降低U87、U138细胞株的IC50，即促进U87、U138细胞株对替莫唑胺化疗的敏感性。过表达CCNG2能够抑制MDR1表达，而对MGMT的表达无显著影响；而干扰CCNG2表达后，MDR1的表达量相对增多，应用MDR1抑制剂后干扰CCNG2细胞株IC50降低。体内试验结果表明联合应用替莫唑胺和过表达CCNG2相较单独应用替莫唑胺能够最大程度的抑制裸鼠移植瘤的生长。免疫组化显示联合应用替莫唑胺和过表达CCNG2治疗组中，代表肿瘤微血管密度的CD34等指标明显降低。Western blot检测显示U87细胞株中，过表达CCNG2能够抑制肿瘤耐药相关MDR1的表达。但是此结果在U251细胞株没有得到验证。而U138细胞株中存在与U87细胞株中类似的结果。.结论：CCNG2过表达能够在体内、体外促进恶性胶质瘤细胞株对替莫唑胺化疗的敏感性，其部分机制可能是通过抑制肿瘤耐药基因MDR1的表达实现的。本课题为胶质瘤的生物学治疗提供了一定理论依据。