Ⅱ组冠状病毒NSP1内保守序列LLRKxGxKG与病毒致病力的关系研究

冠状病毒可引起人和动物的多种疾病，其中以Ⅱ组冠状病毒危害最为严重，可引起SARS等严重传染病。因此开展Ⅱ组冠状病毒致病机制的研究具有重要意义。但SARS-CoV相关研究受到严格限制，在这种情况下，与SARS-CoV同属Ⅱ组冠状病毒且对人不致病的MHV就成为很好的研究模式株。配对分析发现，MHV和SARS-CoV非结构蛋白1中有一段高度保守的氨基酸序列（LLRKxGxKG）。早期实验结果显示：LLRKxGxKG序列缺失后，MHV突变体对小鼠的致死率大大降低。本研究拟通过分析LLRKxGxKG序列缺失对NSP1蛋白功能的影响，同时检测MHV突变体的复制力、致病力和组织嗜性等方面的变化，从分子、细胞和动物三级水平上揭示Ⅱ组冠状病毒NSP1内保守序列LLRKxGxKG与病毒致病性的关系，以期加深我们对Ⅱ组冠状病毒致病机制的了解，为抗病毒药物的设计和新型减毒疫苗的研制提供参考。

冠状病毒是一大类可以导致人类和家畜染病的人畜共患病病原体，也是迄今为止基因组最大的单股正链RNA病毒。有报道指出，冠状病毒的非结构蛋白1（NSP1）在病毒的致病机制中扮演重要角色，为深入了解冠状病毒NSP1的功能特点，本研究以与人类关系最为密切的II组冠状病毒为切入点，以该组的代表株Mouse Hepatitis Virus A-59（简称MHV A-59）的NSP1中一段高度保守的氨基酸序列(LLRKxGxKG)为研究靶点，利用基于痘苗病毒载体的冠状病毒反向遗传学系统，构建了不含此段氨基酸序列的缺失突变体MHV-nsp1-Δ27，结果显示，在细胞水平上，虽然缺失突变体MHV-nsp1-Δ27与野生型MHV-A59具有相似的病毒生长曲线，但在动物水平上，缺失突变体的致病力显著降低，同时，免疫缺失突变体的小鼠能够抵御野生型病毒的致死性攻击，为进一步分析保守序列在突变病毒减毒机制中的作用，分别构建了NSP1蛋白和缺失LLRKxGxKG序列的突变蛋白NSP1-Δ27的真核表达质粒，通过与报告基因质粒共转染等方式，检测NSP1蛋白对其他蛋白的干扰能力，结果显示，NSP1蛋白能够高效的抑制宿主细胞干扰素的生成；缺失保守序列的NSP1蛋白干扰其他蛋白合成的能力大大降低。因此，体内和体外的实验结果均证明保守序列LLRKxGxKG是一个重要的毒力位点。