卵转铁蛋白对树突状细胞免疫调节作用及分子机制研究

Ovotransferrin(OTf) is the main active component in eggs, and has many functions such as enhancing immune function. Dendritic cells (DCs) is the key antigen presenting cell, it can stimulate the proliferation and the differentiation of the initial T cell, and is the initiator of body immune, but the regulation function and mechanism of OTf on DCs is still unknown. This study, the intestinal lympha DCs cultural technology will be built in vitro, and the effects of OTf on intestinal lympha DCs preliferation and maturation will be investigated in normal and immunocomprised mice, also the surface MHC II and costimulators as CD80, CD86, CD40, mRNA expressions of chemotactic cytokines receptors CCR7, CXCR4, protein expressions of p38MAPK, ERK, JNK will be detected, also the effect of OTf on the level of cytokines as TNF-α, IL-12,IL-10,MCP-1,MIP-α,MIP-β and RANTES will be detected. The effect and molecular mechanism of OTf on intestinal mucosa function will be investigated at cellular and molecular levels. The results of the study will provide a theoretical basis for OTf as an immune regulator in functional food, and have a profound affect and an important acadimic value for eggs further utilization and development.

卵转铁蛋白(OTf)是禽蛋的主要生物活性物质，具有免疫增强作用。树突状细胞(DCs)是机体主要的抗原递呈细胞，能刺激初始型T细胞的增殖分化，是机体免疫的始动者，然而OTf对DCs功能的影响及其免疫调节机制还不清楚。本项目拟建立肠淋巴DCs体外细胞培养技术，比较OTf对健康小鼠和免疫低下小鼠肠淋巴DCs发育、成熟等影响；检测其相关的表面MHC-Ⅱ和共刺激因子CD80、CD86、CD40，趋化细胞因子受体CCR7和CXCR4的mRNA表达和p38MAPK、ERK、JNK等相关蛋白质含量的变化；及对细胞因子TNF-α、IL-10、 IL-12、 MCP-1、MIP-1α、MIP-1β、RANTES等含量的影响。从细胞和分子水平阐明OTf对小鼠肠DCs功能的影响及其免疫调节分子机制。本研究可为OTf作为免疫调节功能因子在保健食品中的应用提供理论依据，对禽蛋的深度开发利用具有指导意义。

卵转铁蛋白( OVT)是禽蛋蛋清蛋白的主要成分，约占蛋清总蛋白的12%，是一个单链酸性糖蛋白，具有调节体内铁离子的平衡及一系列生物活性——抗菌，抗病毒及免疫调节等作用。然而，卵转铁蛋白如何影响细胞因子的产生，实现免疫功能和免疫调节的途径和机制还不十分清楚，制约了禽蛋的深度开发利用。本项目研究了小鼠肠淋巴树突状细胞分离，OVT及其酶解物对树突状细胞（DCs）功能的影响及免疫调节的作用机制。项目建立了小鼠肠淋巴树突状细胞分离、培养方法；通过体内外试验，经流式细胞仪检测DCs表面特征性分子表达，ELISA测定细胞培养上清液中细胞因子，MLRs测定成熟DCs引发同种异体小鼠脾脏T细胞增殖，Western-blot测定MAPK通路下p38MAPK、JNK和ERK以及它们的磷酸化蛋白，揭示了OVT对DCs成熟和免疫调节的途径主要有：OVT通过上调DCs的p-p38MAPK、JNK，p-JNK蛋白的表达，激活MAPK信号途径，促进DCs 分泌相应的共刺激分子 MHC-Ⅱ，CD83，CD86等，诱导DCs 的成熟，同时，促进DCs分泌TNF-α等促炎性细胞因子，为初始T 细胞提供活化信号，介导T细胞的增殖分化，调节免疫反应。OVT胃蛋白酶酶解物（PH）减弱LPS诱导的DCs p-p38，p-JNK表达，而促进p-ERK表达，降低了MHC-II,CD83和CD86表型分子表达，抑制DCs的成熟，减弱LPS诱导的DCs对T淋巴细胞的增殖作用，抑制LPS诱导的DCs 分泌促炎细胞因子TNF-α,IL-12p70和趋化因子RANTES，而显著增加IL-10分泌量，表现为抗炎作用。OVT胰蛋白酶解物上调了LPS诱导的DCs p-JNK和p-ERK表达量，激活MAPK信号途径， 上调LPS诱导的DCs 表面MHC-II和共刺激分子CD83，CD86表达，促进DCs成熟，增强LPS诱导的DCs对T淋巴细胞的增殖作用，促进LPS诱导DCs 分泌TNF-a,IL-12p70和趋化因子RANTES，减少IL-10分泌量，表现为促炎作用。OVT能诱发由环磷酰胺所致的免疫低下小鼠肠树突状细胞增殖，DCs表面CD80、CD40和MHC-II分子表达量增加，促进DCs 的成熟，调节免疫反应。本项目的资助发表了学术论文4 篇，参加国内外学术会议和交流12 人次。