miRNAs介导WTX失活在结直肠癌进展中的作用机制研究

WTX是新的X染色体上的抑癌基因，我们前期研究发现WTX在结直肠癌中表达降低或缺失，并与结直肠癌进展和预后密切相关。目前肿瘤中WTX失活机制尚不清楚，miRNAs对WTX的调控情况未见报道。我们通过结直肠癌组织标本miRNA芯片分析、生物信息学预测并结合预实验结果，发现3个miRNA可能在结直肠癌中互补结合WTX 3'UTR，调节其表达及功能。为验证上述设想，本研究将普查结直肠癌中上述miRNAs表达状态（qRT-PCR和原位杂交）、分析它们与WTX关系（luciferase 报告系统），鉴定调控WTX的miRNAs；再从细胞和整体水平验证它们对调节WTX及结直肠癌细胞生物学特性的影响（目标miRNA及WTX的过表达及干扰结合相关常规实验）；明确可能调控WTX的miRNAs，探讨其与WTX失活关系及其在结直肠癌进展过程中的意义，为结直肠癌发病机制及分子靶向治疗研究提供新线索。

我们在前期研究基础上首先验证WTX在结直肠癌中表达降低或缺失，利用miRNA芯片分析WTX低表达结直肠癌和配对正常结直肠粘膜组织miRNA表达差异情况，结合芯片分析、生物信息学预测及结直肠癌癌组织及细胞系qRT-PCR实验验证，筛选到2个与WTX表达负相关的miRNAs（miR-106a及miR-20a）。经过双荧光素酶报告系统分析检测WTX与miRNAs相互作用关系，证明miR-106a及miR-20a均能够直接调控WTX表达。再利用miRNAs inhibitor和mimic分别证明miR-106a及miR-20a表达改变可以负性调控WTX在结直肠癌细胞中表达。而且CCK8法，体外侵袭实验和细胞凋亡检测等证明，miR-106a及miR-20a抑制后，结直肠癌细胞LS174t和SW620的增殖、迁移能力下降，细胞凋亡增加。稳定miR-106a及miR-20a过表达的HCT116细胞株增殖、迁移能力增强，细胞凋亡降低。研究明确了结直肠癌中WTX失活受miR-106a及miR-20a负性调控，miR-106a及miR-20a通过抑制WTX表达，促进结直肠癌增殖、迁移能力，并抑制细胞凋亡；从而促进结直肠癌进展。我们还进一步分析了WTX影响的下游信号通路分子，发现多个信号通路可能受WTX影响并在结直肠癌转移等过程中发挥重要作用。