新型RGD肽修饰类肝素多糖材料的制备及对皮肤细胞、组织增殖的影响

本项目拟以三磺酸钠胺为磺化剂，壳聚糖、海藻酸钠为原料，合成新型类肝素多糖衍生物替代肝素。 RGD肽在细胞识别，黏附，增殖中具有重要作用。将RGD肽接枝到类肝素多糖衍生物上, 以提高细胞的粘附和生长，促进伤口愈合。通过体外细胞和组织培养，考察不同分子参数RGD肽-多糖衍生物对人体皮肤表皮细胞、皮肤成纤维细胞和皮肤微粒增殖的影响。通过动物实验、组织切片、免疫组化、酶联免疫吸附试验、皮肤羟脯氨酸值和Ⅲ型胶原含量的测定，考察RGD肽-多糖衍生物对伤口的愈合、生长因子的活化、疤痕的形成和血小板减少的影响，寻找促进愈合的活性结构。将其应用在播植的皮粒上，促进皮粒的尽快血管化、生长因子特异性结合与活化及皮肤细胞的分裂增殖，加速皮粒的存活及表皮扩展，减少感染，抑制疤痕的产生，从而使创面皮肤得到修复。本课题以治疗大面积皮肤缺损这一医学难题为研究目标，具有理论价值和应用前景。

肝素是一类糖胺聚糖，其在创伤愈合特别是烧伤治疗上有着广泛的应用.。肝素具有抗炎症、使创面愈合加快，减少疤痕产生等功能。但肝素来源较少，因此许多研究者试图通过多糖的磺酸化来制备结构类似肝素的替代物，研究较多的有壳聚糖、褐藻多糖、硫酸软骨素等。胶原蛋白肽被认为是促进细胞黏附和生长的多肽序列，本项目拟构造一个模拟体内细胞生存的人工环境和生物支架材料，为种子细胞的黏附、增殖、分化提供良好基底，促进组织愈合。.研究内容.1）以三磺酸钠胺作为磺化试剂，制备羧甲基壳聚糖硫酸酯、羧 丁酰壳聚糖硫酸酯、海藻酸钠硫酸酯。.2）以EDC和NHS、转谷氨酰胺酶作为缩合剂，将胶原蛋白肽接枝到壳聚糖、海藻酸钠、羧甲基纤维素、羧甲基卡拉胶以及壳聚糖衍生物上。.3）通过体外细胞培养和组织培养，研究胶原蛋白肽-类肝素多糖衍生物的生物相容性及其对人体皮肤成纤维细胞的增殖影响，以及对表皮和真皮组织生长的影响。.4）通过动物实验、组织切片考察不同分子参数的胶原蛋白肽-类肝素多糖衍生物对伤口愈合的影响。.重要结果：. 项目团队成功合成了羧甲基壳聚糖硫酸酯、羧丁酰壳聚糖硫酸酯和海藻酸钠硫酸酯。并成功将胶原蛋白肽接枝到多种多糖及衍生物上，包括壳聚糖、羧甲基壳聚糖、海藻酸钠、羧甲基卡拉胶等。研究发现，多种胶原蛋白肽-多糖衍生物对小鼠皮肤成纤维细胞具有细胞增殖和粘附作用，动物实验及组织切片显示，其对小鼠烧伤伤口愈合有促进作用。.关键数据：.1、羧甲基壳聚糖硫酸酯、羧丁酰壳聚糖硫酸酯和海藻酸钠硫酸酯的PT、TT、APTT分别达到29.7s、31.85s、79.77s，20.76s、24.63s、87.21s，22.4s、41.6s、170.4s，均具有一定的抗凝血活性。.2、胶原蛋白肽接枝多糖及其衍生物均对成纤维细胞具有一定的增殖作用，其中，海藻酸钠-胶原蛋白肽增殖率最大，达到122%，且能够缩短小鼠烫伤皮肤的愈合时间，海藻酸钠-胶原蛋白肽14d的伤口愈合率达到99.4%，明显高于对照组的60.2%。.科学意义. 多糖和胶原蛋白肽都具有良好的生物相容性，且胶原蛋白肽是皮肤组织的组成成分，衍生物构造了一个模拟体内细胞生存的人工环境和生物支架材料，为种子细胞的黏附、铺展、增殖、分化提供良好基底，促进组织愈合，使皮肤创面得到修复.