Zbed3在非小细胞肺癌发生发展中的作用及分子机制的研究

A study has shown that Zbed3 could inhibit the function of Axin-GSK3β complex and thus promote proliferation of NIH3T3 cells. We found that downregulation of Zbed3 using siRNA significantly inhibits non-small cell lung cancer (NSCLC) cell proliferation and invasion, and downregulates expression ofβ-catenin and p120ctn-1. However the mechanism involved need further study. We found Zbed3 was located in cytoplasm and nuclear of cancer cells. We assume that Zbed3 could regulate cytoplasm-nuclear shuttling of β-catenin besides its function of regulating β-catenin degradation, and it also could regulate factors regulating cell cycle or other factors through BED domain. Furthermore, we assume that Zbed3 could regulate cancer cell invasion and metastasis through regulating p120ctn-1 and consequently affecting function of E-cadherin complex. In this program we intend to investigate the molecular mechanism involved in regulation of carcinogenesis and development of NSCLC by Zbed3 through building mutants of Axin and Zbed3, Western blotting, immunofluorescence, Real-Time PCR, immunoprecipitation, Chromatin immunoprecipitation, MTT, Transwell and nude mice xenograft transplantation experiments and thus provide experimental basis for carrying out clinical treatment of NSCLC based on molecular targets of its proliferation, invasion and metastasis.

研究发现BED锌指结构域蛋白Zbed3能通过阻碍Axin复合体功能促进NIH3T3细胞增殖。我们发现干扰Zbed3表达能抑制肺癌细胞增殖及侵袭，并下调β-catenin及p120-ctn1表达，但机制还有待研究。我们发现Zbed3在癌中定位于细胞浆及细胞核，推测其除调节β-catenin降解外，还能影响其核浆穿梭，并通过BED结构域调控细胞周期调节因子或其它潜在因子。另外Zbed3可能通过调节p120-ctn1影响E-cahderin复合体功能从而促进侵袭转移。我们拟构建Axin及Zbed3不同位点的突变体质粒，通过转染双向调控Zbed3，β-catenin及E-cahderin等的表达，利用免疫印记，免疫荧光，实时定量PCR，免疫共沉淀，染色质免疫共沉淀，MTT，Transwell，癌细胞动物移植实验等揭示Zbed3调控非小细胞肺癌发生发展的分子机制，为临床开展分子靶向治疗提供实验基础。

背景：肺癌的发病率逐年上升，已成为病死率最高的恶性肿瘤。深入研究其发生，发展的分子机制是临床开展靶向治疗的基础。Wnt通路异常在包括非小细胞肺癌在内的多种肿瘤的发生及进展中起重要作用。Zbed3是一种BED锌指结构蛋白，我们前期的研究显示其在非小细胞肺癌中高表达，并与患者临床进展相关，体外实验显示其能调节肺癌细胞增殖及侵袭，及Wnt通路关键分子β-catenin的表达。本项目要解决的关键问题是Zbed3促进肺癌增殖侵袭的分子机制，为临床开展靶向治疗打下实验基础。.内容：本项目的研究内容主要包括：. 1.Zbed3调节非小细胞肺癌增殖及侵袭的作用是否通过调节Wnt通路活性及β-catenin和P12cnt-1的表达. 2.Zbed3在非小细胞肺癌中调节β-catenin的作用的后是否通过Axin-GSK3β复合体. 3.Zbed3的BED结构域对肺癌细胞增殖的作用.重要结果及关键数据：. 1.Zbed3通过调节β-catenin和P12cnt-1的表达及Wnt通路活性促进非小细胞肺癌增殖，侵袭转移及肿瘤形成. 2.Zbed3通过Axin-GSK3β复合体调节β-catenin和P12cnt-1的表达，并至少部分通过Axin-GSK3β复合体调节非小细胞肺癌增殖，侵袭转移及肿瘤形成。. 3.Zbed3的BED结构域影响其与Axin的结合及相应的功能。. 4.Zbed3通过调节PCNA促进肺癌细胞增殖，其BED结构域影响对PCNA的调节作用。.研究结果的科学意义：本研究明确了Zbed3通过Axin-GSK3β复合体调节Wnt通路活性，并通过BED结构域调节PCNA表达，促进非小细胞肺癌增殖及侵袭转移，为以Wnt 通路分子及Zbed3为靶点的临床治疗提供实验依据，具有潜在的实际应用的意义。