具有潜在疫苗价值的弓形虫新基因wx2生物学特性及其作用机制研究

弓形虫是一种严重危害人类健康和畜禽业发展的细胞内寄生原虫，所致弓形虫病流行范围广，是一种严重危及人类健康和优生优育的人兽共患疾病，防治难度大。目前弓形虫病防治的难点之一就是缺乏足够保护性的抗原分子，本课题组通过单克隆技术、免疫筛选cDNA文库获得1个弓形虫新基因， 预测其为一个与Ca离子通道相关的分泌蛋白，且其DNA疫苗对弓形虫感染具有较好的保护力，可能是一个很有前景的弓形虫疫苗候选分子，因此我们拟进一步系统深入研究阐明该基因的功能，并观察该基因与宿主病理以及虫株毒力间的关系，为弓形虫基因改造及减毒疫苗研制奠定理论基础,并丰富弓形虫功能基因组信息。解析其蛋白晶体结构，明确其作用机理，并为其在药物领域的开发和利用提供了理论依据。

弓形虫是一种严重危害人类健康和畜禽业发展的细胞内寄生原虫，所致弓形虫病流行范围广，是一种严重危及人类健康和优生优育的人兽共患疾病，防治难度大。目前弓形虫病防治的难点之一就是缺乏足够保护性的抗原分子，本课题组通过单克隆技术、免疫筛选cDNA文库获得1个弓形虫新基因， 预测其为一个与Ca离子通道相关的分泌蛋白，且其DNA疫苗对弓形虫感染具有较好的保护力，可能是一个很有前景的弓形虫疫苗候选分子，因此我们拟进一步系统深入研究阐明该基因的功能，并观察该基因与宿主病理以及虫株毒力间的关系，为弓形虫基因改造及减毒疫苗研制奠定理论基础,并丰富弓形虫功能基因组信息。解析其蛋白晶体结构，明确其作用机理，并为其在药物领域的开发和利用提供了理论依据。该课题经过4年的研究，我们基本完成了课题设计的目标。1.获得了高表达的wx2纯化蛋白，2.并本次实验首次证实了弓形虫蛋白WX2、MIC3、P24都可以通过TLR1/2，TLR2/CD14，TLR4信号通路途径刺激机体产生产生细胞免疫。3.证实了弓形虫新基因wx2能同时在弓形虫急性期、慢性期表达，提示，该基因作为疫苗可能对急慢性弓形虫感染均有保护力。4.初步证实wx2重组蛋白对弓形虫感染兔血清的诊断价值。5.利用TAIL-PCR技术克隆了弓形虫wx2-5′端非编码区大小为521bp的片段。生物信息学分析初步鉴定wx2启动子区域为123bp~212bp间，核心启动子区域为162bp～212bp间，TSS位点在174bp处，wx2-5′端非编码区内含一个TATA盒，一个CpG 岛横跨转录起始位点和第一启动子。6.通过免疫筛选噬菌体随机文库和Affymetrix基因芯片表达谱分析，发现弓形虫wx2基因可能通过MEKK介导的MAPK途径维持细胞基因组稳定性、抑制细胞凋亡、促进细胞增殖、增加细胞骨架的稳定性；弓形虫wx2基因可能通过参与内质网应激信号通路途径调节细胞凋亡； wx2能够通过p38MAPK磷酸化介导的MAPK信号传导通路降低细胞的迁移能力。目前进一步的鉴定确证尚在继续。基本阐明弓形虫新基因wx2的基因功能及潜在作用机制。