犬瘟热病毒N基因-犬细小病毒VP2基因构建重组狂犬病病毒的研究

The homologous recombination ,gene replacement,gene insertion and reverse genetics methods are used to further study the saved recombinant rabies virus,rSRV9 in this project.the purpose is to(1) transfer G genes of rSRV9 virus from the fourth genome to the second genomes in the rearrangement of rSRV9 virus gene in order to increase the expression of G gene of rabies virus; (2) insert the Egfp report genes into sequences between G gene and P gene to construct recombinant rabies virus (3) insert the canine distemper virus N genes and canine parvovirus VP2 gene respectively into sequences after G gene and M gene to construct recombinant rabies virus genome plasmid with canine distemper N genes and canine parvovirus VP2 gene;(4) save recombinant rabies virus rSRV9+CDVN+VP2 after co-transfection of recombinant rabies virus genome plasmid and packed proteines in BHK-21. The saved rSRV9+CDVN+VP2 virus can be used to prepare the triple oral vaccine against rabies, canine distemper and canine parvovirus infection in dogs , foxes , wolfes and other wild animals.

本项目在已成功拯救的狂犬病rSRV9病毒的基础上，使用基因同源重组、基因替换、基因插入以及反向遗传学方法，试图做如下研究：（1）重排rSRV9狂犬病病毒的基因序列，即将rSRV9狂犬病病毒基因组的G基因从基因组的第四位移至第二位，以提高G基因的表达量；（2）将eGFP报告基因插入到重排后的rSRV9病毒G基因和P基因序列之间；（3）将犬瘟热N基因和犬细小病毒VP2基因分别插入重排后的rSRV9病毒G基因和M基因的后序列，以构建带有犬瘟热G基因和犬细小病毒VP2基因的重排狂犬病病毒基因组质粒；（4）用带有犬瘟热G基因和犬细小病毒VP2基因的重排狂犬病病毒基因组质粒和包装蛋白在BHK-21细胞中共转染，然后拯救rSRV9+CDVN+VP2重组病毒。 拯救的rSRV9+CDVN+VP2重组病毒可用于犬科动物及其他野生动物狂犬病、犬瘟热、细小病毒三联口服疫苗的研制，以预防三种传染性疾病的传播

本项目在已成功拯救的狂犬病rSRV9病毒的基础上，使用基因同源重组、基因替换、基因插入以及反向遗传学方法，试图做如下研究：（1）重排rSRV9狂犬病病毒的基因序列，即将rSRV9狂犬病病毒基因组的G基因从基因组的第四位移至第二位，以提高G基因的表达量；（2）将eGFP报告基因插入到重排后的rSRV9病毒G基因和P基因序列之间；（3）将犬瘟热N基因和犬细小病毒VP2基因分别插入重排后的rSRV9病毒G基因和M基因的后序列，以构建带有犬瘟热G基因和犬细小病毒VP2基因的重排狂犬病病毒基因组质粒；（4）用带有犬瘟热G基因和犬细小病毒VP2基因的重排狂犬病病毒基因组质粒和包装蛋白在BHK-21细胞中共转染，然后拯救rSRV9+CDVN+VP2重组病毒。.拯救的rSRV9+CDVN+VP2重组病毒可用于犬科动物及其他野生动物狂犬病、犬瘟热、细小病毒三联口服疫苗的研制。